P2P c: p2p/p2p.c at master · Martiusweb/p2p · GitHub

Содержание

Есть ли в c фреймворк P2P?



Я пытаюсь реализовать некоторые функции p2p с помощью c. Есть ли какие-то рамки?

Что вы думаете о том, чтобы взять libtorrent (http: / / libtorrent.rakshasa.no/) и сделать там какую-то адаптацию?

Или кто-нибудь знает хороший c framework/library?

Обновление 1: Точнее: я хотел бы поделиться небольшими пакетами данных (метаданных) между сверстниками. Пакеты данных должны быть распределены между всеми одноранговыми узлами (каждый одноранговый узел должен иметь каждый пакет данных).

Спасибо

c frameworks p2p
Поделиться Источник Jonas Schnelli     12 октября 2011 в 10:30

2 ответа


  • Библиотека P2P для C++

    Есть ли хорошая кросс-платформенная библиотека C++ для P2P сетей (предпочтительно UDP, но TCP также будет работать). Первоначально я планировал использовать libjingle , но поскольку они не предоставляют никаких предварительно скомпилированных библиотек и имеют довольно грязную систему сборки, я в...

  • C++ winsock с P2P

    Сценарий Есть ли у кого-нибудь хорошие примеры peer-to-peer (p2p) сетей в C++ с использованием Winsock? Это требование, которое я предъявляю к клиенту, который специально должен использовать эту технологию (бог знает почему). Мне нужно определить, осуществимо ли это. Любая помощь будет очень...



5

Chimera является преемником Tapestry, одной из оригинальных сетей наложения 4 P2P (наряду с CAN, Печеньем и аккордом). Это написано в C: http://current.cs.ucsb.edu/проекты/химера/

Обратите внимание, что это оверлейная сеть базового уровня, поверх которой вы можете создавать другие материалы (например, обмен сообщениями или общий доступ к файлам).

Поделиться Canuck     22 октября 2011 в 20:56



1

Если вы пытаетесь смоделировать P2P, то эта ссылка(P2PSim) может быть полезна http://pdos.csail.mit.edu/p2psim/

Поделиться lighthouse     12 октября 2011 в 10:44


Похожие вопросы:


Есть ли какая-либо связь .Net P2P в RTMFP fashon library+server?

Таким образом, Actionscript имеет RTMFP , который может быть использован для P2P mesh-сети связи с централизованным сервером , который контролирует открытые порты и собирает одноранговые IPs . Тем...


Существуют ли какие-либо зрелые фреймворки/библиотеки P2P в C#?

Я ищу надежный фреймворк P2P или библиотеку, предпочтительно изначально написанную на C#,, но также способную работать с чем-то, с чем может взаимодействовать C#. Вы сталкивались или работали с...


Библиотека p2p c++ с поддержкой windows?

У меня есть базовая виртуальная среда (VE), сделанная из opengl. В нем много подвижных кубиков. Он имеет управляемую пользователем сферу, которая может сталкиваться и изменять положение подвижных...


Библиотека P2P для C++

Есть ли хорошая кросс-платформенная библиотека C++ для P2P сетей (предпочтительно UDP, но TCP также будет работать). Первоначально я планировал использовать libjingle , но поскольку они не...


C++ winsock с P2P

Сценарий Есть ли у кого-нибудь хорошие примеры peer-to-peer (p2p) сетей в C++ с использованием Winsock? Это требование, которое я предъявляю к клиенту, который специально должен использовать эту...


Python библиотека / фреймворк для написания P2P приложений

Существует ли какая-либо библиотека или фреймворк для написания P2P приложений в Python ? Я знаю, что первый клиент Bittorrent был написан в Python. Я смотрю что-то вроде JXTA , но для Python.


Есть ли в сетях P2P отключенные компоненты?

Может ли кто-нибудь предоставить ссылки на любую статью/ссылку, в которой говорится о отключенных компонентах в сетях P2P?


Java P2P фреймворк не JXTA/JXSE

Мне нужен фреймворк Java для реализации простого протокола P2P, который должен иметь по крайней мере следующие функции: экспертной организации (Регистрация, открытие) XML обмен сообщениями запрос Я...


Есть ли там реализация базы данных p2p

В настоящее время я исследую p2p моделей приложений. Я считаю, что даже несмотря на то, что одноранговые узлы обмениваются данными друг с другом, где-то все еще есть сервер базы данных, который...


Возможна ли нативная C++ WiFi P2P сеть на Android устройствах?

Мой текущий проект Android требует возможности настроить сеть local p2p на соседних устройствах, используя некоторый аромат WiFi (например, WiFi, WiFi Direct, WiFi Aware и т. д..) Испробовав Android...

Перевод денег с карты на карту любого банка — iPay.ua

Сервис iPay.ua предлагает удобную, а главное - безопасную услугу быстрых денежных переводов на карту выпущенную любым украинским банком.

Как сделать перевод на карту любого банка?

Воспользоваться услугой переводов с карты на карту достаточно просто. Введите следующие данные:

  • 16-ти значный номер Вашей банковской карты, её CVV-код и срок действия;
  • Ваш мобильный номер;
  • Сумму перевода;
  • 16-ти значный номер карты на которую будет зачислен перевод, а также, при желании, контакты получателя для того чтобы мы могли оповестить его о зачислении средств на счет.

Всего за пару минут перевод будет выполнен и средства поступят на указанную Вами карту!

Наши тарифы и условия

Сервис iPay.ua предлагает самые выгодные тарифы. Комиссия составит 1% от суммы перевода +5 гривен. При этом комиссию оплачивает отправитель.

Даже если получатель в данный момент находится за пределами страны, деньги будут зачислены на его банковскую карту.

Гарантия защиты Ваших данных

Все операции, совершаемые на сайте iPay.ua находятся под защитой технологии 3D-Secure. Введенные Вами данные тщательно шифруются в соответствии с протоколом PCI DSS, который был разработан ведущими мировыми платежными системами. Сервис iPay.ua использует анти-фрод систему, распознающую и блокирующую любые попытки мошеннических транзакций.

Банки Украины нам доверяют

Нам доверяют банки Украины, а также их клиенты! Уже сегодня в числе партнеров сервиса iPay.ua находятся 13 украинских банков, на сайтах которых каждый клиент может с легкостью совершить денежный перевод на карту:

Смело пользуйтесь услугой на сайте своего банка. А если Вашего банка в этом списке не оказалось, то всегда есть наш сервис!

Сделки c P2P-деривативами на основе Биткоина

16 апреля (UTC) в Биткоин-блокчейне между компаниями Crypto Garage и Blockstream был заключен “не требующий доверия” форвардный контракт на основе нового однорангового деривативного протокола для криптоактивов. Оракул автоматически произвел расчет транзакции с использованием спотовой цены из фида данных о криптовалютах ICE Cryptocurrency Data Feed, тем самым продемонстрировав возможность осуществления обмена и расчета деривативами без участия третьих лиц и без рисков со стороны контрагентов.

Что такое форвардный контракт?

Форвардный контракт — это тип дериватива, представляющий собой двустороннее соглашение о покупке или продаже активов по фиксированной цене (форвардной ставке) в определенный момент в будущем, в основном применяемый для хеджирования ценовых рисков. Форвардная ставка — это взаимно согласованная справедливая расчетная цена, учитывающая такие факторы, как спотовая цена при заключении договора, рост процентных ставок и стоимость хранения. Форвардные контракты заключаются между двумя сторонами, как правило, без участия бирж и клиринговых компаний, поэтому для выполнения условий соглашения обе стороны должны доверять друг другу.

Деривативные контракты в Биткоин

Фьючерсные контракты аналогичны форвардным, однако чаще всего используются в Биткоин-индустрии на таких биржах как BitMEX и CME. В дополнение к спекулятивному трейдингу фьючерсы используются в практических целях такими клиентами как пулы для майнинга, чтобы хеджировать риск волатильности, связанный с хранением большого количества биткоинов на балансе. Фьючерсы обеспечиваются лишь частично, при этом биржа выступает в качестве обеспечивающего сделку посредника. Из-за ограниченного обеспечения серьезные колебания цен могут привести к тому, что биржа (и ее клиенты!) окажутся у разбитого корыта.

С другой стороны, форвардные контракты обычно не имеют никакого обеспечения и требуют обеспечительных мер от обеих сторон. Оба подхода основаны на взаимном доверии между двумя сторонами, участвующими в договоре. Отсутствие обеспечения означает, что каждая сторона рискует тем, другая сторона не выполнит свои обязательства по контракту.

Именно для таких ситуаций мы и предлагаем вашему вниманию “не требующие доверия” форвардные контракты, новый вид P2P-дериватива.

Новый подход к доверию

Контракт с минимальным доверием позволяет обеим сторонам обеспечивать и блокировать биткоины в смарт-контракте с мультиподписью 2-из-2 до даты его погашения, когда он автоматически выплачивается с использованием подписей участников и оракула, которому вверено отслеживать цену.

В основе этой реализации на основе Биткоин от компании Crypto Garage лежат контракты Discreet Log (DLC), впервые предложенные Тадеушем Друя (Thaddeus Dryja) из MIT Digital Currency Initiative. Ютака Накасоне (Yutaka Nakasone) из Crypto Garage развил эту концепцию в рамках “форвардных контрактов, не требующих доверия”, применив финансовый инжиниринг для подготовки практического использования DLC в качестве финансового инструмента.

Чтобы начать транзакцию, сторона A и сторона B публикуют максимальную прибыль и убыток, заложенный ими для сделки. Затем все возможные результаты контракта предварительно генерируются как частичные транзакции, известные как транзакции исполнения контракта (CETx). Когда наступает дата погашения, оракул оглашает спотовую цену BTCUSD с подписью, и либо сторона A, либо сторона B отправляет подпись к соответствующей CETx.

После получения подписи и успешной проверки ее совпадения с подписью оракула, расчет считается завершенным. Если один из контрагентов попытается передать ложное сообщение, отличающееся от ставки, оглашенной оракулом, этот контрагент потеряет всю сумму своего финансового обеспечения в пользу честного (или более медленного) контрагента. Чтобы стимулировать быстрое закрытие, если ни один из контрагентов не ставит подпись в дату погашения, транзакция переходит в состояние «с задержкой», и сторона, осознавшая это первой, может поставить подпись, чтобы вывести все финансовое обеспечение.

День сделки

9 апреля Crypto Garage и Blockstream заключили контракт, по условиям которого каждая сторона предоставила обеспечение в размере примерно 0,16 BTC по цене исполнения 5 250 долларов США за 1 BTC, срок действия которого истекал в 00:00 по UTC 16 апреля, и его расчет должен был быть произведен в течение следующего часа. Сделка была построена с максимальным и минимальным значениями спотовой цены, используемой в форвардном расчете, так что ни одна из сторон не рисковала потерять больше той суммы, которую она предоставила в качестве обеспечения, что исключало необходимость доверять контрагенту с точки зрения дополнительных сборов. Blockstream, конечно, был на длинной позиции по Биткоину.

В 00:40 по UTC 16 апреля Blockstream и Crypto Garage рассчитались по форвардному контракту по цене 5 032 долларов США, исходя из фида данных о криптовалютах ICE Cryptocurrency Data Feed, и объявленное обеспечение было автоматически перераспределено в их кошельки. Чистый доход Crypto Garage составил 4,3 миллиона сатоши (приблизительно 230 долларов США) благодаря своей проницательности короткой позиции.

Стоит отметить, что Blockstream продолжает оставаться на длинной позиции по BTC и компания не изменила бы свое решение, даже при наличии машины времени.

Дальше больше

Эта транзакция была осуществлена в сети Биткоин, но Crypto Garage планирует расширить свою деятельность в области крипто-деривативов и поддерживать различные типы контрактов в сети Liquid Network для Liquid-биткоинов (L-BTC) и других выпущенных активов (Issued Assets) в сети. JPY-стейблкоин в Liquid от компании Crypto Garage — единственный японский токен JPY, одобренный FSA, который предоставит несколько очень интересных примеров использования с минимальным доверием в ближайшем будущем.

Присоединиться

Приложения с минимальным доверием P2P-деривативов скоро появятся в сети Liquid Network компании Blockstream. Компаниям, желающим получить дополнительную информацию о членстве в сети, следует связаться с Blockstream. Желающим изучить P2P-деривативы на основе Биткоин или заключить собственный деривативный контракт с минимальным доверием, следует обратиться в Crypto Garage за дополнительной информацией.

Настройка удалённого доступа к системам видеонаблюдения на базе 3G c использованием P2P и облачных с

Хотите организовать систему видеонаблюдения с удалённым доступом, но не имеете наземной линии связи? Вам помогут сети 3G и облачные сервисы.

С расширением сегмента бюджетных IP камер и удешевлением тарифов на симметричный широкополосный доступ в Интернет, удалённое видеонаблюдение пошло в массы. В прошлой статье мы уже рассмотрели четыре наиболее популярных подхода к организации удалённого видеонаблюдения. Однако мы намеренно обошли стороной сети 3G как потенциальный способ передачи данных, так как сочли необходимым посвятить этой теме отдельную статью. Учитывая растущую популярность мобильного интернета и тенденции роста загородного строительства, со временем такой способ организации видеонаблюдения будет всё более востребован.

Тестируем качество покрытия

Первое, что предстоит сделать перед началом организации удалённого видеонаблюдения на объекте — это убедиться в наличии на нём сети 3G. Каждый крупный оператор мобильной связи размещает на своём сайте карту покрытия, обновляемую с появлением новых ретрансляторов. Однако мы не рекомендуем нашим читателям полагаться на подобные карты, ибо представленные на них данные очень уж оптимистичны и умозрительны. Куда достоверней оценить своё «место под сотой» поможет одно из бесплатных мобильных приложений для Android:

Данный софт прост в освоении и позволяет в считанные минуты оценить качество покрытия, используя один лишь смартфон. Пользователю будет показана реальная скорость приёма и передачи информации, количество находящихся поблизости ретрансляторов и даже приблизительное расстояние до них. Вам останется только выбрать оператора, чья сеть вас больше устраивает по характеристикам на конкретном земельном участке.

Владельцы техники Apple могут воспользоваться бесплатным сервисом SpeedTest, не требующим установки и моментально отображающим входящую и исходящую скорость интернет-соединения.

Выбор 3G модема

Большая часть российских мобильных операторов использует модели ZTE MF190, Huawei E171, Е352 или аналогичные по своим характеристикам. В принципе, эти бюджетные устройства вполне справляются с возложенными на них задачами. В большинстве случаев переплата за более дорогой модем не приносит пользователю никаких преимуществ. Если стоит цель улучшить соединение, куда разумней будет вложиться в покупку внешней антенны. К слову, мало кто знает, но даже у самых дешёвых USB-модемов есть приоритет в получении и передаче пакетов перед смартфонами. Так настроены протоколы 3G сетей.

Выбор схемы удалённого видеонаблюдения

Как и в случае с наземным интернет-каналом, видеонаблюдение с использованием технологии 3G может быть реализовано несколькими способами.

Способ №1: IP камеры, роутер, модем 3G

В данной схеме подключения нет видеорегистратора, поэтому все сетевые функции полностью возлагаются на роутер. К его выбору стоит подойти обстоятельно, так как далеко не все модели поддерживают режим работы с 3G модемами. Более того, наличие разъёма USB и поддержки 3G модемов ещё не гарантирует, что роутер будет работать конкретно с вашим устройством. Чтобы убедиться в полной совместимости, рекомендуем зайти на сайт производителя и найти там список поддерживаемых 3G модемов.

Если роутер был куплен вами ещё до прочтения данной статьи и оказалось, что он не поддерживает имеющуюся в вашем распоряжении модель 3G модема, ситуацию можно попробовать исправить при помощи прошивки роутера. Одним из лучших поставщиков неофициальных прошивок является портал http://dd-wrt.com/. Однако, установив стороннюю прошивку, вы лишитесь гарантии, так что прошивать устройство вам придётся на свой страх и риск.

Итак, 3G модем и роутер выбраны, осталось правильно их настроить. Для этого мы подключаемся к роутеру с любого компьютера или ноутбука посредством комплектного патч-корда (его нужно вставить в любой свободный разъём, кроме «WAN») и заходим в сетевой интерфейс устройства, вбив его IP-адрес в браузере. Далее необходимо найти в меню роутера пункт «Тип соединения WAN» и сменить выставленный в нём по умолчанию PPPoE на Mobile Broadband (мобильный интернет/3G интернет). После этого необходимо ввести данные для подключения к мобильному оператору: APN, логин и пароль. Часто эти данные уже вшиты в модем и передаются на роутер автоматически. Если этого не происходит, осуществите ввод вручную.

После того как данные введены, роутер попросит разрешение на перезагрузку. После неё попробуйте войти в Интернет с вашего компьютера: если подключение осуществляется без проблем — вы всё сделали правильно. Если подключение не произведено, попробуйте другие номера дозвона и другие варианты APN, предлагаемые мобильным оператором. К слову, на рынке появляется всё больше моделей роутеров, которые производят все настройки и подключение автоматически. Пользователю необходимо лишь выбрать страну и оператора, после чего дожидаться соединения.

Далее мы воспользуемся преимуществами технологии P2P. Камеры, поддерживающие пиринговые сети, не нуждаются в выделенном IP адресе, так как не работают по принципу клиент-сервер. Фактически они являются одновременно и клиентом, и сервером. Чтобы подключиться к P2P устройству, вам не нужно приобретать у провайдера статический IP-адрес и настраивать роутер, достаточно лишь ввести идентификатор (ID/Серийный номер устройства).

Как только вы подключили все камеры к Интернету посредством роутера, они тут же начинают транслировать запрос о готовности к соединению. После ввода уникального ID/Серийного номера, приложение на вашем компьютере или мобильном устройстве подхватывает этот запрос и начинает трансляцию видеопотока. Скачать P2P приложение для доступа к камере можно с официального сайта её компании-производителя. Вводить ID/Серийный номер можно вручную или сканируя QR-код на корпусе камеры, что намного удобней.

Итак, мы получили видеосигнал с камеры на своём компьютере/мобильном устройстве и убедились в правильности настройки нашего оборудования. Теперь пришло время подумать о безопасности. Чтобы к вашей системе наблюдения не могли получить доступ посторонние, нужно последовательно подключиться к каждой камере, используя патч-корд, и сменить логин и пароль через сетевой интерфейс.

Ваша система удалённого видеонаблюдения может включать в себя столько IP камер сколько будет поддерживаться роутером. Для удобства рекомендуем использовать камеры одного производителя.

Способ №2: IP или HDCVI камеры, регистратор, роутер, модем 3G

Использование видеорегистраторов открывает пользователю много новых возможностей, таких как доступ к видеоархиву, моментальное переключение между камерами, интеграция с датчиками движения/задымления и другим оборудованием.

Рассмотрим создание системы удалённого видеонаблюдения на примере видеорегистратора Dahua HCVR5108H V2. Для начала необходимо подключить регистратор к роутеру и зайти в его сетевой интерфейс. После этого вставьте ваш 3G модем в роутер и подождите несколько секунд. На экране появится меню, предлагающее перейти в раздел 3G. Если модем уже прошит под конкретного провайдера, то регистратор без проблем считает все данные, необходимые для подключения к сети. Пользователю останется лишь нажать кнопку «соединение» и подождать несколько секунд. Когда вы увидите в верхней части экрана индикатор мощности сигнала, а в нижней — присвоенный регистратору «серый» IP-адрес, это будет означать, что 3G соединение успешно установлено.

Далее нам необходимо активировать режим P2P. Для этого мы переходим в главное меню регистратора, выбираем раздел «сеть» и заходим в подпункт «P2P настройки», где отмечаем галочкой поле «ВКЛ». На этой же странице имеется QR-код, просканировав который вы получите доступ к вашему регистратору с любого устройства, подключенного к Интернету.

Доступ к сетевому интерфейсу регистратора Dahua и просмотр видеопотоков с камер наблюдения возможен с любого типа устройств. Главное правильно выбрать программу:

  • PSS для любого компьютера под управлением Windows и iOS;

  • iDMSS для мобильных устройств Apple;

  • gDMSS для мобильных устройств на базе Android.

Вы также можете воспользоваться универсальным способом для всех устройств: открыть сайт облака http://www.easy4ip.com/ в Internet Explorer.

Пиринговые сети поддерживаются всеми регистраторами от компании Dahua Technology. Подробнее о том, как подключиться к регистратору Dahua с мобильного устройства, используя облако, читайте в нашей следующей статье.

Способ №3: IP или HDCVI камеры, регистратор, модем 3G

Некоторые видеорегистраторы позволяют подключить 3G модем напрямую, без использования роутера в качестве посредника. Чтобы узнать, поддерживает ли ваша модель такой функционал, зайдите на официальный сайт компании-производителя и поищите её в списке устройств, поддерживающих USB 3G модем.

Учтите, что при данном способе организации системы IP видеонаблюдения все камеры придётся подсоединять к регистратору с помощью витой пары. Не задействуя роутер с Wi-Fi модулем, вы лишаетесь возможности беспроводного соединения с камерами. Исключение составляют регистраторы с встроенным Wi-Fi модулем, однако подобных решений на рынке пока не так уж много.

Способ №4: модем 3G и единственная IP камера

Если вы хотите поставить на объекте всего одну камеру и уверены, что в дальнейшем не станете расширять вашу систему видеонаблюдения, это вполне осуществимо с использованием современных облачных сервисов. Одним из лучших, на наш взгляд, является веб-сервис Ivideon. Он не требует от пользователя «белого» IP, прост в настройке, может работать с любым провайдером мобильного интернета и позволяет подключать до двух камер с поддержкой P2P абсолютно бесплатно.

Чтобы камера соединилась с облачным сервисом, она должна поддерживать его на уровне прошивки. Так, к примеру, вышеупомянутый Ivideon поддерживают отдельные модели производства Philips, Hikvision, Microdigital и Axis. Более подробную информацию о поддержке камер другими облачными сервисами ищите на их официальных сайтах.

Камеры, изначально прошитые под определённый P2P сервис, очень удобны. Все действия пользователя сводятся к выбору мобильного оператора, 3G модема и включения оборудования в сеть. Соединение с ближайшим дата-центром облачного сервиса осуществляется автоматически в зависимости от вашего географического местоположения.

Использование пиринговых технологий — настоящая находка для пользователей, которым нужно поставить одну камеру в гараже или на даче. Как правило, крупные облачные сервисы позволяют бесплатно подключить одному клиенту до двух камер (при этом они могут быть на разных объектах). Больше того, подобные сервисы не заинтересованы в заработках с продажи оборудования, поэтому часто выкладывают на своих сайтах обновлённые прошивки для камер, активирующие возможность работы с их облаком.

Заключение

Использование пирингового протокола передачи данных сделало видеонаблюдение ещё на один шаг ближе к пользователю. Сегодня уже не нужно обладать какими-то особыми знаниями и навыками в области сетевого администрирования, чтобы удалённо следить за маленьким ребёнком, загородным домом или гаражом. Облачные сервисы делают всё для того, чтобы максимально упростить процесс настройки, а камеры становятся всё доступнее с каждым днём.

< Предыдущая статья: Популярные способы организации видеонаблюдения через Интернет

> Следующая статья: Подключаемся к регистратору Dahua с мобильных устройств и компьютеров, используя облачный сервис (P2P)

Полное руководство по P2P торговле

Полное руководство по P2P торговле

1. Требования к аккаунту

2. Настройки аккаунта для P2P торговли

3. Комиссии

4. Методы оплаты

5. Как купить криптовалюту на P2P

6. Как продать криптовалюту на P2P

7. Как разместить объявление на Binance P2P

8. Апелляции

9. Рекомендации для безопасной торговли

10. Мерчант программа

1) Требования к аккаунту и правила торговли

Для осуществления торговых операций на Binance P2P необходимо иметь верифицированный аккаунт, подключить SMS и Google аутентификацию.

Как зарегистрировать аккаунт на Binance

Как верифицировать учетную запись на Binance

Как подключить Google аутентификацию

Все пользователи до начала торговли на Binance P2P должны обязательно ознакомиться с Политикой Проведения Транзакций между пользователями на Binance P2P.

2) Настройки аккаунта для P2P торговли

До начала торговли необходимо настроить методы оплаты.

Добавить нужный вам способ оплаты вы можете перейдя по этой ссылке, или выбрав “Подробнее” - “Настройки оплаты” через главную страницу Binance P2P.

Binance P2P поддерживает более 100 способов оплаты. Популярные методы оплаты теперь отображаются на самом верху списка, в “Рекомендуемых”.

3) Комиссии

В настоящее время комиссии за использование P2P-платформы Binance не взимаются (они равны нулю).  При покупке криптовалюты, продаже криптовалюты и создании объявлений - 0%.

4) Методы оплаты

В настоящее время Binance P2P поддерживает более 100 методов оплаты среди которых:

Сбербанк, Тинькофф, Наличный расчет, Внесение наличных на счет (Кэш ин), Яндекс Деньги, QIWI, Webmoney, Advcash, Payeer, СБП (система быстрых платежей), Мир, Paypal, SEPA, SWIFT, Revolut, Perfect Money, Neteller, Payoneer, ApplePay, Альфа-Банк, ВТБ, Пополнение баланса мобильного телефона и другие. Полный список Вы можете увидеть в настройках оплаты вашего аккаунта по ссылке.

5) Как купить криптовалюту на P2P

Для перехода на P2P с главной страницы, нажмите “Купить криптовалюту” - “P2P торговля”.

Объявления сортируются по цене и по времени обновления.Это означает, что в топе располагаются объявления с лучшей ценой на продажу.

Каждое рекламное объявление содержит информацию о цене, доступном торговом объеме в криптовалюте, минимальной и максимальной сумме за одну транзакцию, и статистику трейдера.

Подробнее о каждом параметре, читайте в нашем блоге по этой ссылке.

Воспользуйтесь фильтром, чтобы выбрать объявление  по цене, объему и подходящему методу оплаты, затем нажмите “Купить”.

Обратите внимание на “Условия сделки”. 

В данном разделе указана дополнительная информация от продавца.Уделите особое внимание данному разделу. Если вам не подходят условия продавца, найдите другое объявление. Если условия продавца не противоречат условиям торговли на платформе, то считается, что покупатель по умолчанию принимает условия продавца при открытии сделки. 

Укажите сколько криптовалюты вы хотите купить.Вы можете указать конкретный объем в криптовалюте, или указать сумму, которую вы хотите заплатить в фиатной валюте. Нажмите “Купить сейчас”.

После того как вы разместите заказ, в ордере будет указана необходимая информация для совершения оплаты, а именно:

- реквизиты продавца для осуществления перевода

- точная сумма

- временное окно для оплаты (время, в течение которого необходимо завершить платеж, или заказ отменится системой автоматически)

Встроенный чат позволяет пользователям связываться друг с другом, и, при необходимости, уточнить детали по транзакции.

Как только вы завершите оплату, отметьте заказ как оплаченный, нажав на кнопку “Переведено, далее” и дожидайтесь перевода криптовалюты от продавца.

Не нажимайте “Оплачено” до фактической оплаты!

Если вы нажали “Оплачено” случайно, то вы можете отменить заказ, нажав на кнопку “Отменить заказ”.

Если по истечению времени продавец не перевел криптовалюту, нажмите кнопку “Апелляция”, и дождитесь ответа службы поддержки по электронной почте.

Важно отметить, что на данном этапе, необходимое количество криптовалюты уже заморожено на балансе продавца, поэтому, вы можете быть уверены, что даже если продавец, по какой-то причине не осуществит перевод, служба поддержки сможем завершить транзакцию в ручном режиме при наличии у вас подтверждения факты оплаты.

По завершению сделки, купленные вами цифровые активы будут зачислены на ваш P2P баланс автоматически.

6) Как продать криптовалюту на Binance P2P (веб интерфейс)

Для того чтобы продать криптовалюту на P2P, она должна быть на балансе вашего P2P кошелька.

Если вы осуществляете депозит в криптовалюты из других сервисов, то для того, чтобы пополнить свой баланс на Binance, перейдите в “Спотовый кошелек” и нажмите “Ввод”.

После того как ваш баланс будет пополнен криптовалютой, необходимо перевести активы на P2P кошелек.

Для этого нажмите:

“P2P аккаунт” - “Перевод”(напротив того активы, который вам необходимо перевести)

Укажите необходимую сумму, которую вы хотите перевести на P2P, и подтвердите перевод. Готово!

Перейдите на главную страницу Binance P2P, и выберите вкладку “Я хочу продать”:

Каждое рекламное объявление содержит в себе информацию о цене, доступной торговом объеме в криптовалюте, который пользователь готов купить, а также, минимальный и максимальный лимит за одну транзакцию.

Выберете подходящее для вас предложение по цене, объему и лимитам, затем нажмите “Продать”.

Обратите внимание на “Условия сделки”. 

В данном разделе указана дополнительная информация от покупателя.Уделите особое внимание данному разделу. Если вам не подходят условия покупателя, найдите другое объявление. Если условия покупателя не противоречат Политике Проведения Транзакций между пользователями, то считается, что продавец по умолчанию принимает условия покупателя при открытии сделки.

Внимание: Пользователям не разрешено взимать никаких дополнительных комиссий. Цена объявления является окончательной, и должна включать в себя все возможные комиссии межбанковских и межрегиональных переводов.

При этом, продавец должен использовать только тот метод оплаты, который указан в объявлении. В случае игнорирования условий покупателя, продавец имеет право открыть спор и отказаться от проведения сделки.

Ознакомьтесь с Политикой Проведения Транзакций на платформе Binance P2P.

Выберите подходящее предложение и нажмите “Продать”.

Вы можете указать сколько криптовалюты вы хотите продать, или указать сумму в фиатной валюте, которую вы хотите получить - в таком случае, вы увидите сколько монет вы получите по данной цене.

Нажмите “Продать” чтобы разместить заказ.

Обратите внимание:

- Срок оплаты - время, в течение которого покупатель должен будет совершить платеж (окно оплаты может быть от 15 минут до 6 часов, и устанавливается самим ПОКУПАТЕЛЕМ при создании объявления)

- Способ оплаты - используйте только тот метод оплаты, который указан в объявлении. Если вы видите, что кнопка “Продать” не активна и система предлагает вам установить способ оплаты, это значит, что в ваших добавленных методах оплаты нет ни одного метода, совпадающего с методом покупателя. Перейдите в настройки, чтобы добавить другие реквизиты, или выберите другое объявление.

В открывшемся ордере, вы увидите время, в течение которого покупатель должен совершить платеж.

Используйте встроенный чат, для общения с покупателем. 

После того как покупатель совершит перевод на реквизиты указанные в вашем аккаунте, он отметит заказ как оплаченный.

Внимание: НИКОГДА не переводите активы, до фактического получения денег на ваш счет. Никакие аргументы, спешка и даже отправленные чеки с подтверждением оплаты не должны сподвигнуть вас перевести активы. Проверьте баланс вашего банковского счета через онлайн- банкинг, чтобы убедиться в поступление средств. Только после того как вы удостоверитесь, что оплата получена, нажмите на кнопку “Подтвердить перевод”.

На данном этапе отменить заказ невозможно.

В случае, если покупатель отметил заказ как оплаченный, а вы не получили деньги, то откройте апелляцию по заказу, и служба поддержки рассмотрит данный случай, и примет решению в пользу правой стороны.

Если в процессе рассмотрения апелляции будет доказано, что покупатель не отправил деньги, то заказ будет отменен, и вы получите обратно ваши активы.

7) Как разместить объявление на Binance P2P

Для того чтобы разместить объявление перейти на главную страницу Binance P2P, выберите раздел “P2P торговля” в верхнем меню:

Нажмите на “Опубликовать”, чтобы перейти в раздел публикации объявлений.

Выберите вкладку “Хочу купить” или “Хочу продать”, в зависимости от торговой операции, которую вы хотите совершить.

Если вы хотите продать свою криптовалюту, то выберите вкладку “Хочу продать” и заполните форму.

Необходимо указать актив, который вы желаете купить или продать, фиатную валюту, которую вы хотите обменять, и установить цену.

Цена может быть “фиксированной” или “плавающей”. “Плавающая” цена привязана к биржевому курсу, и будет автоматически меняться в вашем объявлении, следуя за рыночной ценой. Все, что необходимо - это указать вашу маржу.

На следующем этапе создания объявления, вам необходимо указать общий объем криптовалюты который вы хотите купить или продать, а так же установить лимиты для одной транзакции.

Например, вы можете указать минимальную сумму для проведения сделки, и максимальную сумму, которую вы готовы принять или отправить за одну транзакцию.

Далее, укажите методы оплаты.

“Окно оплаты” - это временной интервал для оплаты. 

Если вы создаете объявление на продажу, то “окно оплаты” это временной интервал, в течение которого ПОКУПАТЕЛЬ должен будет завершить платеж.

Если вы создаете объявление на покупку, то “окно оплаты” это временной интервал в течение которого ВЫ должны завершить платеж.

На последнем этапе напишите условия для проведения сделки. 

В этом окне можно указать любую информацию, которая относится к объявлению и является важной при совершении сделки. 

Внимание: Ваши условия сделки НЕ должны противоречить Политике Проведения транзакций между пользователями.

Раздел “Требования к контрагенту” рекомендуется оставить без изменений. Чем больше критериев для контрагента вы устанавливаете, тем меньше для вас потенциальных контрагентов, и, возможно, вам придется ждать клиента дольше, чем обычно.

Все готово! Нажмите “Опубликовать” и ваше объявление будет опубликовано в общем списке объявлений на Binance P2P.

Для того чтобы отредактировать свое объявление, обновить или удалить его, перейдите на вкладку “Мои объявления”.

8) Апелляции

Платформа Binance P2P не является ни одной из сторон операций P2P. 

Все сделки осуществляются напрямую между пользователями. 

Если стороны не в состоянии разрешить свои разногласия, можно подать апелляцию, нажав на кнопку «Апелляция». Служба поддержки поможет сторонам разрешить спор. Пока конкретная операция находится в стадии апелляции, криптовалюта будет оставаться заблокированной до урегулирования спора.

Служба поддержки свяжется с участвующими в споре пользователями по электронной почте в максимально короткие сроки. 

Чтобы помочь в рассмотрении апелляции будьте готовы предоставить доказательства по спорной сделке. При необходимости, служба поддержки может потребовать предоставить чеки по совершенным транзакциям, банковские выписки или видео из вашего банковского приложения.

После открытия апелляция служба поддержки свяжется с вами в течение 12 часов.

Внимательно ознакомьтесь с нашими правилами рассмотрения апелляций.

9) Рекомендации для безопасной торговли

Для того чтобы торговля на Binance P2P была безопасной, необходимо следовать нескольким основным правилам:

- Все общение должно осуществляться через чат на Binance P2P

- Не проводите сделки ВНЕ платформы

- При получении платежа от покупателя, убедитесь, что платежная информация покупателя совпадает с информацией Binance аккаунта вашего контрагента

- При продаже криптовалюты не переводите ваши активы до получения оплаты

- Остерегайтесь мошенников в социальных сетях и мессенджерах

- Убедитесь, что ваш аккаунт защищен - включите 2FA 

Узнать больше информации о безопасности вы можете если прочитаете нашу статью в блоге и руководство по безопасному трейдингу в FAQ.

10. Мерчант программа

Мерчант программа рассчитана на профессиональных трейдеров, которые ежедневно активно торгуют как в направлении покупки, так и в направлении продажи. Мерчанта Binance P2P на платформе отличает наличие желтой галочки рядом с ником. Данные пользователи прошли дополнительную верификацию на платформе, подтвердив свою личность и свой торговый опыт.

Преимущества мерчант программы:

- Повышенные лимиты по объявлениям

- Эксклюзивная служба поддержки для мерчантов

- Удобная и функциональная административная панель для управления торговлей

- Дополнительные настройки курса

- Возможность работы с разными платежными счетами

- Возможность создавать скрытые объявления

- Возможность подключения дополнительных фильтров для контрагентов

Как стать мерчантом на Binance P2P:

  1. Необходимо заполнить форму и предоставить необходимые документы

  2. Иметь подтвержденный опыт P2P трейдинга не менее 6 мес на Binance P2P или других P2P платформах

При рассмотрении анкеты дополнительно учитываются такие показатели как общий торговый оборот в криптовалюте, торговый оборот за месяц, количество успешных сделок и рейтинг трейдера.

P2P (Peer To Peer) Обмен файлами

Введение
В компьютерных сетях P2P - это технология обмена файлами, позволяющая пользователям получать доступ в основном к мультимедийным файлам, таким как видео, музыка, электронные книги, игры и т. Д. Отдельные пользователи в этой сети обозначаются как одноранговых узла . Одноранговые узлы запрашивают файлы у других одноранговых узлов, устанавливая TCP или UDP-соединения.

Как работает P2P (Обзор)
Одноранговая сеть позволяет компьютерному оборудованию и программному обеспечению обмениваться данными без необходимости в сервере.В отличие от архитектуры клиент-сервер, в архитектуре P2P нет центрального сервера для обработки запросов. Одноранговые узлы напрямую взаимодействуют друг с другом без использования центрального сервера.

Теперь, когда один одноранговый узел делает запрос, возможно, что несколько одноранговых узлов имеют копию этого запрошенного объекта. Теперь проблема в том, как получить IP-адреса всех этих пиров. Это определяется базовой архитектурой, поддерживаемой системами P2P. С помощью одного из этих методов клиентский партнер может узнать обо всех одноранговых узлах, у которых есть запрошенный объект / файл, и передача файла происходит непосредственно между этими двумя одноранговыми узлами.

Существуют три такие архитектуры:

  1. Централизованный каталог
  2. Наводнение запросов
  3. Использование неоднородности

1. Централизованный каталог



  • Это несколько похоже на архитектуру клиент-сервер в том смысле, что он поддерживает огромный центральный сервер для обеспечения службы каталогов.
  • Все узлы сообщают этому центральному серверу свой IP-адрес и файлы, которые они делают доступными для совместного использования.
  • Сервер опрашивает одноранговые узлы через равные промежутки времени, чтобы убедиться, что одноранговые узлы все еще подключены или нет.
  • Таким образом, в основном этот сервер поддерживает огромную базу данных о том, какой файл на каких IP-адресах присутствует.

Рабочий

  • Теперь всякий раз, когда запрашивающий узел входит, он отправляет свой запрос серверу.
  • Поскольку сервер имеет всю информацию о своих партнерах, он возвращает одноранговому узлу IP-адреса всех одноранговых узлов, у которых есть запрошенный файл.
  • Теперь между этими двумя узлами происходит передача файлов.

Первой системой, в которой использовался этот метод, была система Napster для целей распространения Mp3.

Основная проблема такой архитектуры заключается в наличии единой точки отказа. Если сервер выйдет из строя, вся P2P сеть выйдет из строя. Кроме того, поскольку вся обработка должна выполняться одним сервером, необходимо поддерживать и регулярно обновлять огромный объем базы данных.

2. Флудинг запросов

  • В отличие от централизованного подхода, этот метод использует распределенные системы.
  • В этом случае одноранговые узлы должны быть подключены в оверлейную сеть. Это означает, что если существует соединение / путь от одного узла к другому, он является частью этой оверлейной сети.
  • В этой оверлейной сети одноранговые узлы называются узлами, а соединение между одноранговыми узлами называется границей между узлами, что приводит к графоподобной структуре.

Рабочий

  • Теперь, когда один партнер запрашивает какой-либо файл, этот запрос отправляется всем его соседним узлам, то есть всем узлам, которые подключены к этому узлу. Если у этих узлов нет необходимого файла, они передают запрос своим соседям и так далее. Это называется переполнением запросов.
  • Когда одноранговый узел с запрошенным файлом найден (это называется совпадением запроса), лавинная рассылка запросов прекращается и отправляет обратно имя файла и размер файла клиенту, следуя, таким образом, обратному пути.
  • Если имеется несколько совпадений запроса, клиент выбирает из одного из этих одноранговых узлов.

Gnutella была первой децентрализованной одноранговой сетью.


Этот метод также имеет некоторые недостатки, например, запрос должен быть отправлен всем соседним одноранговым узлам, если не найдено совпадение. Это увеличивает трафик в сети.

3. Использование неоднородности

  • Эта архитектура P2P использует обе описанные выше системы.
  • Это похоже на распределенную систему, такую ​​как Gnutella, потому что нет центрального сервера для обработки запросов.
  • Но, в отличие от Gnutella, он не относится ко всем своим сверстникам одинаково. Одноранговые узлы с более высокой пропускной способностью и сетевым подключением имеют более высокий приоритет и называются лидерами группы / суперузлами . Остальные одноранговые узлы назначаются этим суперузлам.
  • Эти суперузлы связаны между собой, и одноранговые узлы под этими суперузлами информируют своих соответствующих руководителей о своем подключении, IP-адресе и файлах, доступных для совместного использования.

Технология KaZaA является примером, в котором используются как Napster, так и Gnutella.
Таким образом, отдельные лидеры группы вместе со своими детьми-сверстниками из структуры, подобной Napster. Эти лидеры групп затем соединяются между собой, чтобы напоминать структуру, похожую на гнутеллу.

Рабочий

  • Эта структура может обрабатывать запросы двумя способами.
  • Первый заключается в том, что суперузлы могут связываться с другими суперузлами и объединять свои базы данных со своей собственной базой данных.Таким образом, этот суперузел теперь имеет информацию о большом количестве одноранговых узлов.
  • Другой подход заключается в том, что когда поступает запрос, он пересылается на соседние суперузлы до тех пор, пока не будет найдено совпадение, как в Gnutella. Таким образом, лавинная рассылка запросов существует, но с ограниченной областью действия, поскольку каждый суперузел имеет много дочерних узлов. Следовательно, такая система использует неоднородность сверстников, назначая одних из них лидерами / суперузлами групп, а других - их дочерними сверстниками.

Ссылки - Компьютерные сети: подход сверху вниз Джеймс Ф.Kurose

Автор статьи Arushi Dhamija . Если вам нравится GeeksforGeeks и вы хотите внести свой вклад, вы также можете написать статью, используя write.geeksforgeeks.org, или отправить свою статью по адресу [email protected] Посмотрите, как ваша статья появляется на главной странице GeeksforGeeks, и помогите другим гикам.

Пожалуйста, напишите комментарии, если вы обнаружите что-то неправильное, или если вы хотите поделиться дополнительной информацией по теме, обсуждаемой выше.

Вниманию читателя! Не прекращайте учиться сейчас.Ознакомьтесь со всеми важными концепциями теории CS для собеседований SDE с помощью курса CS Theory Course по доступной для студентов цене и будьте готовы к отрасли.

Определение одноранговой (P2P) службы

Что такое одноранговая (P2P) служба?

Одноранговая (P2P) услуга - это децентрализованная платформа, на которой два человека взаимодействуют напрямую друг с другом без посредничества третьей стороны. Вместо этого покупатель и продавец взаимодействуют друг с другом напрямую через службу P2P.Платформа P2P может предоставлять такие услуги, как поиск, проверка, оценка, обработка платежей или условное депонирование.

Ключевые выводы

  • Одноранговая служба - это платформа, которая напрямую соединяет стороны транзакции без стороннего посредника.
  • Одноранговые службы используют технологию для преодоления транзакционных издержек доверия, правоприменения и асимметрии информации, которые традиционно устраняются с помощью доверенных третьих сторон.
  • Одноранговые платформы
  • предлагают своим пользователям такие услуги, как обработка платежей, получение информации о покупателях и продавцах, а также обеспечение качества.
Что такое экономика совместного использования?

Общие сведения об услугах одноранговой сети (P2P)

Современная одноранговая концепция была популяризирована системами обмена файлами, такими как приложение для обмена музыкой Napster, появившееся в 1999 году. Одноранговое движение позволило миллионам пользователей Интернета напрямую подключаться, формировать группы и сотрудничают друг с другом, чтобы функционировать в качестве созданных пользователями поисковых систем, виртуальных суперкомпьютеров и файловых систем. Эта модель организации сети отличается от модели клиент-сервер, где связь обычно осуществляется с центральным сервером.

Сегодня услуги P2P вышли за рамки чисто интернет-сервисов, хотя в большинстве своем они считаются как минимум интернет-услугами. Одноранговые услуги включают действия, которые варьируются от простых покупок и продаж до тех, которые считаются частью экономики совместного использования. Некоторые одноранговые сервисы даже не предполагают платных транзакций со стороны пользователей, но они объединяют людей для работы над совместными проектами, обмена информацией или общения без прямого посредничества. Эти виды услуг P2P могут использоваться как бесплатные некоммерческие услуги или приносить доход за счет рекламы для пользователей или продажи данных пользователей.

Когда третья сторона удаляется из транзакции, существует больший риск того, что поставщик услуги может не предоставить, что услуга не будет иметь ожидаемого качества, что покупатель может не заплатить или что одно или оба из стороны могут воспользоваться асимметричной информацией. Этот дополнительный риск представляет собой дополнительные транзакционные издержки для транзакции P2P. Часто P2P-сервисы создаются с целью облегчения этих транзакций и снижения риска как для покупателя, так и для продавца.Покупатель, продавец или оба могут оплатить стоимость услуги, или услуга может предлагаться бесплатно и приносить доход другим способом.

Примеры услуг одноранговой сети (P2P)

Программное обеспечение с открытым исходным кодом

Кто угодно может просматривать и / или изменять код программного обеспечения. Программное обеспечение с открытым исходным кодом пытается устранить центрального издателя / редактора программного обеспечения путем краудсорсинга кодирования, редактирования и контроля качества программного обеспечения среди авторов и пользователей.

Обмен файлами

Совместное использование файлов - это место, где загрузчики и загрузчики встречаются для обмена медиафайлами и файлами программного обеспечения.В дополнение к одноранговой сети службы обмена файлами могут обеспечивать сканирование и безопасность общих файлов. Они также могут предлагать пользователям возможность анонимно обходить права интеллектуальной собственности или, в качестве альтернативы, могут обеспечивать защиту интеллектуальной собственности.

Интернет-магазины

Интернет-площадки представляют собой сеть, в которой частные продавцы товаров могут найти заинтересованных покупателей. Интернет-магазины могут предлагать услуги по продвижению для продавцов, рейтинги покупателей и продавцов на основе истории, обработку платежей и услуги условного депонирования.

Криптовалюта и блокчейн

Блокчейн - это аспект технологии криптовалюты. Это сеть, в которой пользователи могут совершать платежи, обрабатывать и проверять платежи без участия эмитента центральной валюты или расчетной палаты. Технология блокчейн позволяет людям вести бизнес с использованием криптовалют, а также заключать смарт-контракты и обеспечивать их соблюдение.

Совместное использование жилья

Совместное использование жилья позволяет владельцам сдавать в аренду всю или часть своей собственности краткосрочным арендаторам.Услуги по совместному использованию жилья обычно включают обработку платежей, гарантию качества или оценку и квалификацию владельцев и арендаторов.

Райдшеринг

Райдшеринг - это платформа для владельцев автомобилей, предлагающая услуги водителя для людей, ищущих такси. Платформы райдшеринга предлагают аналогичные услуги, как и услуги совместного проживания.

Будущее ботнетов P2P IoT

Интернет вещей (IoT) создал новый домен для разработчиков ботнетов, в котором они могут конкурировать и процветать.Они уже борются друг с другом за устройства, а их жертвы борются с хроническими инфекциями. Но использование хорошо известной технологии обмена файлами - одноранговых (P2P) сетей - может еще больше усложнить ситуацию.

Типичный ботнет Интернета вещей состоит из множества зараженных устройств (ботов), подключенных к командному серверу (C&C), с которого киберпреступники запускают весь ботнет. Это означает, что отключение C&C сервера выводит из строя ботнет, независимо от того, из скольких устройств он состоит.Внедрение P2P-сетей в бот-сети IoT устраняет это решение.

В конце концов, сеть

P2P позволяет компьютерам подключаться друг к другу без необходимости в центральном сервере. На практике это означает, что для отключения ботнета P2P IoT защитникам придется очистить каждое из зараженных устройств - гораздо более утомительная и почти невыполнимая задача, поскольку лучшие бот-сети известны тем, что используют тысячи устройств.

В нашем техническом обзоре мы обсуждаем пять семейств вредоносных программ P2P-ботнетов для Интернета вещей, которые были развернуты в прошлом, и сравниваем темпы, с которыми P2P-сети превращались в вредоносные программы между средами Windows и IoT.Здесь мы обсуждаем последствия использования ботнетов P2P IoT и направление, в котором киберпреступники могут продолжать бороться с этой угрозой.

Воздействие и будущее

Вы можете спросить: почему существует только пять семейств вредоносных программ для ботнета P2P IoT, если они обеспечивают такой хороший способ поддерживать ботнет в течение очень долгого времени? Давайте на мгновение проанализируем, какова на самом деле цель ботнета IoT.

Монетизация - ключ к предсказанию пути развития ботнетов P2P IoT. Чтобы киберпреступники продолжали разрабатывать и внедрять более сложные бот-сети, им нужно найти способ зарабатывать деньги на своих усилиях.Основываясь на сегодняшних ботнетах Интернета вещей, обычным способом монетизации этой угрозы является включение сторонних атак - в форме распределенных атак типа «отказ в обслуживании» (DDoS) и VPN-сервисов.

Для того чтобы ботнеты P2P IoT стали широко распространенными, киберпреступникам необходимо было найти еще более эффективный способ монетизации этих зараженных маршрутизаторов. Мы предполагаем, что киберпреступники переключат свое внимание на зарабатывание денег на сети зараженного маршрутизатора вместо того, чтобы использовать маршрутизатор как простое устройство, подключенное к Интернету.

Заражение маршрутизаторов другими атаками

Основная цель ботнетов Интернета вещей - домашние маршрутизаторы. Что делает маршрутизаторы хорошей мишенью, так это их положение в качестве входов в домашние сети. Зараженный маршрутизатор может позволить киберпреступникам выполнять более опасные действия, такие как атаки типа «злоумышленник в середине» (MitM) и кража информации. Киберпреступники также могут внедрить вредоносные элементы в ответный трафик.

Когда основное внимание уделяется анализу и устранению трафика зараженного маршрутизатора, возможности безграничны.Зараженный маршрутизатор может позволить киберпреступникам осуществлять майнинг криптовалюты на основе JavaScript или мошенничество с кликами, переписывая веб-страницы, чтобы включить необходимые элементы любой схемы. Кроме того, киберпреступники могут просто продавать зараженные компьютеры и украденную информацию и находить еще больше способов монетизировать вредоносное ПО маршрутизатора.

Например, маршрутизатор может также служить плацдармом для киберпреступников, чтобы перейти к другим незащищенным устройствам в сети. Используя маршрутизатор таким образом, злоумышленникам не нужно будет перехватывать трафик для выполнения бокового движения и придется решать проблемы, связанные с шифрованием TLS (Transport Layer Security).Эта схема в некоторой степени соответствует современным подходам к программам-вымогателям или вторжениям с расширенными постоянными угрозами (APT).

При боковом движении злоумышленнику не нужно выбирать между заражением маршрутизатора и заражением отдельного компьютера. Скомпрометированный маршрутизатор может позволить злоумышленнику захватить другие плохо защищенные устройства в сети, включая компьютеры.

Насколько возможны эти сценарии?

Какими бы сложными ни были эти сценарии, цель обсуждения сценариев состоит в том, что они возможны.Вредоносное ПО для ботнета должно будет перехватывать трафик, поступающий изнутри сети, и внедрять произвольные элементы в каждую возвращаемую веб-страницу. С технической точки зрения это влечет за собой вмешательство в стек протоколов маршрутизатора, что, хотя и непросто, но может быть выполнено. Киберпреступники также могут просматривать журналы веб-страниц, к которым обращаются пользователи, в поисках ценной информации, которую они хранят, что относительно проще, чем вмешательство в стек протоколов маршрутизатора.

Прошлое, настоящее и будущее ботнетов Интернета вещей

Сеть

P2P показывает, как бот-сети Интернета вещей могут развиваться дальше, чтобы стать действительно серьезной угрозой.Это основано на исследованиях, которые мы ранее провели по этому вопросу. В нашей статье «Worm Wars: The Botnet Battle for IoT Territory» мы рассмотрели кодовые базы, из которых возникло большинство современных семейств вредоносных программ для ботнетов Интернета вещей. Что еще более важно, мы показали, как активные разработчики ботнетов конкурировали друг с другом за незащищенные устройства. Тем временем наше тематическое исследование VPNFilter показало, что инфекции нельзя по-настоящему вылечить, поскольку они все еще могут каким-то образом существовать в устройстве и нести риски, даже если операции, стоящие за ними, уже давно прекращены.

Уже из этих предыдущих исследований мы видим проблемы, создаваемые ботнетами Интернета вещей. Ботнеты P2P IoT усугубляют эти характеристики, открывая возможность неубиваемого ботнета из-за отсутствия центрального сервера, с которого можно было бы их отключить. Добавление обсуждаемых здесь методов монетизации к неочищаемым и неубиваемым ботнетам может радикально изменить вредоносное ПО для Интернета вещей.

Хотя большинство этих атак сосредоточено на домашних маршрутизаторах или домашних устройствах, организации не должны упускать из виду их важность для собственной безопасности.В наши дни, когда удаленная работа стала нормой, стало намного труднее различить границу, отделяющую домашние сети от корпоративных сетей, и, следовательно, линию, отделяющую атаки потребителей от атак на организации. Злоумышленники могут выбрать целью зачастую менее безопасные домашние сети и маршрутизаторы, чтобы достичь более высоких и ценных целей.

Вышеупомянутые перспективные сценарии, возможно, никогда не осуществятся, но точно известно, что ботнеты P2P IoT уже существуют и представляют реальную опасность как для предприятий, так и для домашних пользователей.Организации и отдельные лица должны изменить свое мышление и поверить в то, что защита их маршрутизаторов так же важна, как и защита их настольных и портативных компьютеров.

Что делать компаниям и домашним пользователям в краткосрочной перспективе? Как они могут предотвратить заражение своих маршрутизаторов? Они могут начать со следующих шагов:

  • Управляйте уязвимостями и как можно скорее применяйте исправления. Применение исправлений сразу после их выпуска может ограничить шансы потенциальных уязвимостей.
  • Примените безопасную конфигурацию. Пользователи должны убедиться, что они используют наиболее безопасную конфигурацию своих устройств, чтобы сузить возможности для компрометации.
  • Используйте надежные пароли, которые трудно угадать. Пользователи могут обойти тактику перебора, изменив пароли по умолчанию и используя надежные пароли.

Удаление сливок или донная ловля?

Автор

Включено в список:
  • de Roure, Калеб
  • Пелиццон, Лориана
  • Такор, Анжан В.

Abstract

Мы получаем три проверяемых прогноза на основе модели конкуренции банк-P2P-кредитор: (a) P2P-кредитование растет, когда некоторые банки сталкиваются с экзогенно более высокими регуляторными издержками, (b) P2P-кредиты более рискованны, чем банковские кредиты; и (c) процентные ставки с поправкой на риск по займам P2P ниже, чем процентные ставки по банковским займам. Мы проверяем эти прогнозы на данных по P2P-кредитам и рынку потребительских банковских кредитов в Германии и находим эмпирическую поддержку. В целом, наш анализ показывает, что P2P-кредиторы ловят рыбу снизу, особенно когда регуляторные потрясения создают невыгодное конкурентное положение для некоторых банков.

Предлагаемое цитирование

  • de Roure, Calebe & Pelizzon, Loriana & Thakor, Anjan V., 2021. « P2P-кредиторы против банков: снятие сливок или донный промысел? », Серия рабочих документов БЕЗОПАСНОСТЬ 206, Институт финансовых исследований им. Лейбница БЕЗОПАСНОСТЬ.
  • Ручка: RePEc: zbw: safewp: 206

    Скачать полный текст от издателя

    Ссылки на IDEAS

    1. Memmel, Christoph & Gündüz, Yalin & Raupach, Peter, 2015.« Общие факторы риска дефолта », Журнал финансовой стабильности, Elsevier, vol. 16 (C), страницы 232-247.
    2. Бенгт Холмстром и Жан Тироль, 1997. « Финансовое посредничество, заемные средства и реальный сектор », Ежеквартальный журнал экономики, Oxford University Press, vol. 112 (3), страницы 663-691.
      • Бенгт Холмстром и Жан Тироль, 1994. « Финансовое посредничество, ссудные фонды и реальный сектор ,» Рабочие бумаги 95-1, Массачусетский технологический институт (MIT), факультет экономики.
      • Холмстрём, Бенгт и Тироль, Жан, 1994. « Финансовое посредничество, ссудные фонды и реальный сектор ,» Рабочие документы IDEI 40, Institut d'Economie Industrielle (IDEI), Тулуза.
    3. Томас Филиппон, 2016. « Возможности FinTech », Рабочие документы NBER 22476, Национальное бюро экономических исследований, Inc.
    4. Бучак, Грег и Матвос, Грегор и Пискорски, Томаш и Серу, Амит, 2018. « Fintech, регулирующий арбитраж и рост теневых банков », Журнал финансовой экономики, Elsevier, vol.130 (3), страницы 453-483.
      • Бучак, Грег и Матвос, Грегор и Пискорски, Томаш и Серу, Амит, 2017. « Fintech, регуляторный арбитраж и рост теневых банков », Научно-исследовательские работы 3511, Стэнфордский университет, Высшая школа бизнеса.
      • Грег Бучак и Грегор Матвос, Томаш Пискорски и Амит Серу, 2017. « Fintech, регуляторный арбитраж и рост теневых банков », Рабочие документы NBER 23288, Национальное бюро экономических исследований, Inc.
    5. Дональдсон, Джейсон Родерик и Пьячентино, Джорджия и Такор, Анджан, 2018. " Склад банковской ," Журнал финансовой экономики, Elsevier, vol. 129 (2), страницы 250-267.
    6. Дуглас У. Даймонд и Филип Х. Дибвиг, 2000. « Банковские пробеги, страхование вкладов и ликвидность », Ежеквартальный обзор, Федеральный резервный банк Миннеаполиса, т. 24 (Победа), страницы 14–23.
      • Diamond, Douglas W & Dybvig, Philip H, 1983. « Банковские пробеги, страхование вкладов и ликвидность », Журнал политической экономии, University of Chicago Press, vol.91 (3), страницы 401-419, июнь.
    7. Puri, Manju & Rocholl, Jörg & Steffen, Sascha, 2011. « Глобальное розничное кредитование после финансового кризиса в США: различение эффектов спроса и предложения », Журнал финансовой экономики, Elsevier, vol. 100 (3), страницы 556-578, июнь.
    8. Мертон, Роберт С. и Такор, Ричард Т., 2019. « Клиенты и инвесторы: основа для понимания эволюции финансовых институтов », Журнал финансового посредничества, Elsevier, vol.39 (C), страницы 4-18.
    9. Адэр Морс, 2015. « Peer-to-Peer Crowdfunding: информация и возможность нарушения потребительского кредитования », Ежегодный обзор финансовой экономики, Annual Reviews, vol. 7 (1), страницы 463-482, декабрь.
    10. Девин Г. Поуп и Джастин Р. Сиднор, 2011. " Что изображено на фотографии?: Доказательства дискриминации от Prosper.com ", Журнал людских ресурсов, University of Wisconsin Press, vol. 46 (1), страницы 53-92.
    11. Робин Гринвуд и Дэвид Шарфштейн, 2013 г.« Рост финансов ,» Журнал экономических перспектив, Американская экономическая ассоциация, т. 27 (2), страницы 3-28, Spring.
    12. Джеральдо Черкейро, Стивен Онгена и Каспер Росбах, 2016 г. « Обеспечение, ставки банковских кредитов и мониторинг ,» Журнал финансов, Американская финансовая ассоциация, т. 71 (3), страницы 1295-1322, июнь.
    13. Коваль, Джошуа Д. и Такор, Анжан В., 2005. « Финансовое посредничество как мост между оптимистами и пессимистами », Журнал финансовой экономики, Elsevier, vol.75 (3), страницы 535-569, март.
    14. Puri, Manju & Rocholl, Jörg & Steffen, Sascha, 2017. « Что говорят миллионы наблюдений о невыполнении обязательств по кредитам? Открытие черного ящика взаимоотношений », Журнал финансового посредничества, Elsevier, vol. 31 (C), страницы 1-15.
    15. Милн, Алистер и Парботия, Пол, 2016. « Бизнес-модели и экономика однорангового кредитования », Документы ЕКРН 11594, Центр исследований европейской политики.
    16. Минфенг Лин и Нагпурнананд Р.Прабхала и Шива Вишванатан, 2013. « Оценка заемщиков компанией, которую они хранят: сети дружбы и информационная асимметрия в одноранговом кредитовании в Интернете », Управленческая наука, ИНФОРМС, т. 59 (1), страницы 17-35, август.
    17. Адэр Морс, 2015. « Peer-to-Peer Crowdfunding: информация и возможность нарушения потребительского кредитования », Рабочие документы NBER 20899, Национальное бюро экономических исследований, Inc.
    Полные ссылки (включая те, которые не соответствуют элементам в IDEAS)

    Цитаты

    Цитаты извлекаются проектом CitEc, подпишитесь на его RSS-канал для этого элемента.


    Цитируется по:

    1. Irani, Rustom & Iyer, Rajkamal & Meisenzahl, Ralf & Peydró, José-Luis, 2021. « Рост теневого банкинга: данные из регулирования капитала », Статьи и главы книг в открытом доступе EconStor, ZBW - Информационный центр экономики имени Лейбница, страницы 2181-2235.
      • Растом М. Ирани, Раджкамал Айер и Ральф Р. Майзензал и Хосе-Луис Пейдро, 2018. « Рост теневой банковской деятельности: свидетельство регулирования капитала », Рабочие документы по экономике 1652 г., Департамент экономики и бизнеса, Universitat Pompeu Fabra, пересмотрено в июле 2020 г.
      • Irani, Rustom M & Iyer, Rajkamal & Meisenzahl, Ralf & Peydró, José Luis, 2018. « Рост теневого банкинга: доказательства из Положения о капитале », Документы для обсуждения CEPR 12913, C.E.P.R. Документы для обсуждения.
      • Растом М. Ирани, Раджкамал Айер, Ральф Р. Мейзензал и Хосе Луис Пейдро, 2018. « Рост теневого банкинга: доказательства из Положения о капитале », Серия дискуссий по финансам и экономике 2018-039, Совет управляющих Федеральной резервной системы (У.С.).
      • Irani, Rustom & Iyer, Rajkamal & Peydró, José-Luis & Meisenzahl, Ralf, 2020. « Рост теневого банкинга: доказательства из Положения о капитале », Препринты EconStor 216799, ZBW - Информационный центр экономики имени Лейбница.
      • Растом М. Ирани, Раджкамал Айер и Ральф Р. Майзензал и Хосе-Луис Пейдро, 2019 г. « Рост теневого банкинга: доказательства из Положения о капитале », Рабочие бумаги 1098, Высшая школа экономики Барселоны.
    2. Никола Бранзоли и Илария Супино, 2020. «Кредит FinTech: критический обзор эмпирического исследования », Questioni di Economia e Finanza (Периодические статьи) 549, Банк Италии, Область экономических исследований и международных отношений.
    3. Франклин Аллен и Джулапа Джагтиани, 2020. " Обзор финансовых исследований и обсуждения политики ," Рабочие бумаги 20-21, Федеральный резервный банк Филадельфии.
    4. Croux, Christophe & Jagtiani, Julapa & Korivi, Tarunsai & Vulanovic, Milos, 2020.« Важные факторы, определяющие дефолт по кредитам в сфере финансовых технологий: данные потребительской платформы lendingclub », Журнал экономического поведения и организации, Elsevier, vol. 173 (C), страницы 270-296.
    5. Такор, Анжан В., 2020. « Финтех и банковское дело: что мы знаем? », Журнал финансового посредничества, Elsevier, vol. 41 (С).
    6. Исил Эрель и Джек Либерсон, 2020. « Заменяет ли FinTech банки? Доказательства программы защиты зарплаты », Рабочие документы NBER 27659, Национальное бюро экономических исследований, Inc.
    7. Оскар Ковалевски, Павел Писани и Эмиль Слазак, 2021 год. « Что определяет межстрановые различия на финансовых и крупных кредитных рынках? », Рабочие бумаги 2021-ACF-02, Школа менеджмента IESEG.
    8. Венхуа Ди и Натаниэль Паттисон, 2020. « Дистанционное кредитование, специализация и доступ к кредитам », Рабочие бумаги 2003 г., Федеральный резервный банк Далласа.

    Самые популярные товары

    Это элементы, которые чаще всего цитируют те же работы, что и эта, и цитируются в тех же работах, что и эта.
    1. Такор, Анжан В., 2020. « Финтех и банковское дело: что мы знаем? », Журнал финансового посредничества, Elsevier, vol. 41 (С).
    2. де Рур, Калеб и Пелиццон, Лориана и Таска, Паоло, 2016. « Как P2P-кредитование вписывается в рынок потребительского кредитования? », Документы для обсуждения 30/2016, Deutsche Bundesbank.
    3. Никола Бранзоли и Илария Супино, 2020. «Кредит FinTech: критический обзор эмпирического исследования », Questioni di Economia e Finanza (Периодические статьи) 549, Банк Италии, Область экономических исследований и международных отношений.
    4. Брэггион, Фабио и Манкони, Альберто и Чжу, Хайкун, 2018. « Может ли технология подорвать макропруденциальное регулирование? Данные однорангового кредита в Китае », Документы для обсуждения CEPR 12668, C.E.P.R. Документы для обсуждения.
    5. Хосе Мария Либерти и Митчелл А. Петерсен, 2018. « Информация: жесткий и мягкий ,» Рабочие документы NBER 25075, Национальное бюро экономических исследований, Inc.
    6. Ботинок, Arnoud & Hoffmann, Peter & Laeven, Luc & Ratnovski, Lev, 2021." Fintech: что старого, что нового? ", Журнал финансовой стабильности, Elsevier, vol. 53 (С).
    7. Bertsch, Christoph & Hull, Isaiah & Qi, Yingjie & Zhang, Синь, 2020. " Банковское неправомерное поведение и онлайн-кредитование ", Журнал банковского дела и финансов, Elsevier, vol. 116 (С).
    8. Раджкамал Айер и Асим Иджаз Хваджа и Эрзо Ф. П. Латтмер и Келли Шу, 2016. « Мягкий отбор коллег: оценка качества мелких заемщиков », Управленческая наука, ИНФОРМС, т.62 (6), страницы 1554-1577, июнь.
      • Раджкамал Айер и Асим Иджаз Хваджа и Эрзо Ф.П. Латтмер и Келли Шу, 2009. « Мягкий отбор коллег: оценка качества мелких заемщиков », Рабочие документы NBER 15242, Национальное бюро экономических исследований, Inc.
      • Асим Хваджа и Раджкамал Айер, Эрзо Латтмер и Келли Шу, 2013. « Мягкий отбор коллег: оценка качества мелких заемщиков », Рабочие документы CID 259, Центр международного развития Гарвардского университета.
      • Айер, Раджкамал и Ходжа, Асим Иджаз и Латтмер, Эрзо Ф. и Шу, Келли, 2013. « Мягкий отбор коллег: оценка качества мелких заемщиков », Серия рабочих документов rwp13-017, Гарвардский университет, Школа государственного управления им. Джона Ф. Кеннеди.
    9. Kräussl, Roman & Kräussl, Zsofia & Pollet, Joshua & Rinne, Kalle, 2018. « Эффективность кредиторов на торговой площадке: данные по платежным данным кредитного клуба ,» Серия рабочих документов CFS 598, Центр финансовых исследований (CFS).
    10. Jagtiani, Julapa & Lemieux, Catharine, 2018. « Проникают ли финтех-кредиторы в области, которые недостаточно обслуживаются традиционными банками? », Журнал экономики и бизнеса, Elsevier, vol. 100 (C), страницы 43-54.
    11. Марко Якшич и Матей Маринч, 2019 г. « Взаимосвязь банковского дела и информационных технологий: роль искусственного интеллекта и FinTech », Управление рисками, Palgrave Macmillan, vol. 21 (1), страницы 1-18, март.
    12. Чжу, Хайкунь, 2018.« Очерки политической экономии финансов и финансовых технологий », Другие публикации TiSEM 93f94423-e671-4041-bb24-8, Тилбургский университет, Школа экономики и менеджмента.
    13. Анагностопулос, Иоаннис, 2018. « Fintech и regtech: влияние на регуляторы и банки ,» Журнал экономики и бизнеса, Elsevier, vol. 100 (C), страницы 7-25.
    14. Адэр Морс, 2015. « Peer-to-Peer Crowdfunding: информация и возможность нарушения потребительского кредитования », Рабочие документы NBER 20899, Национальное бюро экономических исследований, Inc.
    15. Хосе Мария Либерти и Митчелл Петерсен, 2019 г. « Информация: жесткий и мягкий ,» Обзор исследований корпоративных финансов, Oxford University Press, vol. 8 (1), страницы 1-41.
    16. Карла Мартинес-Климент и Ана Зорио-Грима и Доминго Рибейро-Сориано, 2018. « Краудфандинг финансовой отдачи: обзор литературы и библиометрический анализ », Международный журнал предпринимательства и менеджмента, Springer, vol. 14 (3), страницы 527-553, сентябрь.
    17. Дональдсон, Джейсон Родерик и Пьячентино, Джорджия и Такор, Анджан, 2018." Склад банковской ," Журнал финансовой экономики, Elsevier, vol. 129 (2), страницы 250-267.
    18. Мануэль Мира Годиньо, 2020. " Evolução das assimetrias na produção de conhecimento científicoe tecnológico a nível global: análise com enfoque nas trajetórias de Brasil e Portugal ," Рабочие документы REM 2020/0145, ISEG - Лиссабонская школа экономики и менеджмента, REM, Universidade de Lisboa.
    19. Эрика Цзян и Грегор Матвос, Томаш Пискорски и Амит Серу, 2020.« Банковское дело без депозитов: доказательства из отчетов о вызовах теневого банка », Рабочие документы NBER 26903, Национальное бюро экономических исследований, Inc.
    20. Такор, Анжан В., 2018. « Посткризисная реформа регулирования в банковской сфере: устранение риска неплатежеспособности, а не неликвидности! », Журнал финансовой стабильности, Elsevier, vol. 37 (C), страницы 107-111.

    Исправления

    Все материалы на этом сайте предоставлены соответствующими издателями и авторами.Вы можете помочь исправить ошибки и упущения. При запросе исправления укажите дескриптор этого элемента: RePEc: zbw: safewp: 206 . См. Общую информацию о том, как исправить материал в RePEc.

    По техническим вопросам, касающимся этого элемента, или для исправления его авторов, заголовка, аннотации, библиографической информации или информации для загрузки, обращайтесь:. Общие контактные данные провайдера: https://edirc.repec.org/data/csafede.html .

    Если вы создали этот элемент и еще не зарегистрированы в RePEc, мы рекомендуем вам сделать это здесь.Это позволяет связать ваш профиль с этим элементом. Это также позволяет вам принимать потенциальные ссылки на этот элемент, в отношении которых мы не уверены.

    Если CitEc распознал библиографическую ссылку, но не связал с ней элемент в RePEc, вы можете помочь с этой формой .

    Если вам известно об отсутствующих элементах, цитирующих этот элемент, вы можете помочь нам создать эти ссылки, добавив соответствующие ссылки таким же образом, как указано выше, для каждого ссылочного элемента. Если вы являетесь зарегистрированным автором этого элемента, вы также можете проверить вкладку «Цитаты» в своем профиле RePEc Author Service, поскольку там могут быть некоторые цитаты, ожидающие подтверждения.

    По техническим вопросам, касающимся этого элемента, или для исправления его авторов, названия, аннотации, библиографической информации или информации для загрузки, обращайтесь: ZBW - Информационный центр экономики имени Лейбница (адрес электронной почты указан ниже). Общие контактные данные провайдера: https://edirc.repec.org/data/csafede.html .

    Обратите внимание, что исправления могут отфильтроваться через пару недель. различные сервисы RePEc.

    Ген связанного с белком потенциала пролиферации (P2P-R) с доменами, кодирующими гетерогенную ассоциацию ядерных рибонуклеопротеинов и связывание Rb1, демонстрирует подавленную экспрессию во время терминальной дифференцировки

    Терминальная дифференцировка связана с репрессией экспрессии подмножества белков потенциала пролиферации (P2P) гетерогенные ядерные рибонуклеопротеидные (hnRNP) белки.Мы сообщаем здесь о клонировании и характеристике кДНК P2P-связанной (P2P-R) длиной 5173 п.н., которая содержит открытую рамку считывания размером 4214 п.о. Зонды этой кДНК обнаруживают единственную мРНК размером 8 т.п.н. в нескольких тканях мыши и в пролиферирующих клетках 3T3T, но не в терминально дифференцированных адипоцитах 3T3T. Доказательства того, что эта кДНК может кодировать пептиды с доменами для ассоциации hnRNP, были получены путем демонстрации того, что такие пептиды распознаются двумя моноклональными антителами, которые, как известно, обнаруживают основные белки hnRNP, и путем демонстрации того, что моноклональное антитело C130, продуцируемое против слитого белка, полученного из кДНК, также выборочно обнаруживает нативные белки P2P hnRNP.Кроме того, слитые белки, полученные из кДНК P2P-R, связывают одноцепочечные нуклеиновые кислоты, а антисмысловой олигонуклеотид, полученный из кДНК P2P-R, избирательно подавляет экспрессию P2P. Поскольку терминальная дифференцировка связана с модуляцией функции Rb1, мы проанализировали, могут ли продукты этой кДНК взаимодействовать с Rb1. Доказательства того, что кДНК P2P-R кодирует домен белка, который связывает Rb1, были получены с использованием слитого белка глутатион S -трансфераза для селективного осаждения Rb1 из клеточных экстрактов.Данные также показывают, что это связывание снижается за счет конкуренции с белком аденовируса E1a, указывая на то, что связывание происходит через «карманный» домен Rb1. Эти результаты устанавливают, что кДНК P2P-R кодирует белковые домены, участвующие как в ассоциации hnRNP, так и в связывании Rb1, и дополняют недавние сообщения о локализации Rb1 в сайтах процессинга РНК в ядре.

    Установлено, что дифференцировка многих клеточных клонов является многоступенчатым процессом. Это, возможно, лучше всего иллюстрируется анализом дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток 3T3T в адипоциты (1).Недифференцированные клетки 3T3T сначала останавливают свою пролиферацию в фазе G 1 клеточного цикла в отдельном состоянии перед дифференцировкой. Связанная с этим процессом индуцируется экспрессия фактора транскрипции, специфичного для линии PPARγ2 (2). После этого экспрессируется семейство факторов транскрипции C / EBP с последующей индукцией ряда генов дифференцировки адипоцитов, которые включают 422, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу, липопротеинлипазу и адипсин (3-5). Образующиеся адипоциты дифференцируются нетерминально, потому что они могут быть индуцированы для повторной инициации пролиферации и повторного входа в клеточный цикл.Однако адипоциты в нетерминальном состоянии дифференцировки могут быть индуцированы к окончательной дифференцировке под воздействием апролиферина и, таким образом, необратимо теряют свою чувствительность к факторам роста (6). Когда происходит терминальная дифференцировка адипоцитов, очевидна заметная репрессия экспрессии белков потенциала пролиферации (P2P) (7). Также было показано, что подавление экспрессии P2P связано с терминальной дифференцировкой нормальных кератиноцитов человека (7) и со старением человеческих клеток (8).

    P2P представляют собой группу высокоосновных ядерных белков от 35 до 40 кДа, которые могут связываться с РНК и связаны с частицами гетерогенного ядерного рибонуклеопротеина (hnRNP), что определяется седиментацией ядерных компонентов в градиенте сахарозы (7). Антитела, полученные против ядерных hnRNP, распознают P2P, и двумерный гель-электрофорез показал, что P2P являются членами класса A / B белков hnRNP, которые участвуют в процессинге РНК (7, 9).

    Недавно было продемонстрировано, что терминальная дифференцировка требует экспрессии белка-супрессора опухоли Rb1 (10).В исследованиях с использованием миобластов, полученных от нормальных животных, которые экспрессируют Rb1, и миобластов от трансгенных животных, у которых отсутствует Rb1, было установлено, что клетки, лишенные Rb1, не могут окончательно дифференцироваться. Вместо этого они заблокированы в состоянии нетерминальной дифференциации. Эти наблюдения предполагают, что функция продукта гена-супрессора опухоли Rb1 может включать контроль терминальной дифференцировки. Кроме того, продукт гена-супрессора опухоли Вильмса WT1 также участвует в терминальной дифференцировке клеток почечной бластемы во время неонатального развития (11).Белки Rb1 и WT1 также локализованы в ядре в местах процессинга РНК (12, 13).

    Поэтому мы разработали исследования для клонирования и характеристики P2P-связанных (P2P-R) кДНК и теперь описываем кДНК P2P-R со способностью кодировать домены как для связывания Rb1, так и для ассоциации hnRNP. МРНК P2P-R экспрессируется в различных тканях мышей и в растущих недифференцированных мышиных клетках 3T3T. Однако экспрессия мРНК P2P-R специфически подавляется во время терминальной фазы дифференцировки адипоцитов.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Клеточные линии и методы культивирования клеток.

    Линия мезенхимальных стволовых клеток BALB / c 3T3T была подробно описана ранее (14). Растущие однослойные культуры этих клеток поддерживали при 37 ° C в 5% CO 2 в DMEM (Sigma) с добавлением 10% бычьей телячьей сыворотки (HyClone). В некоторых исследованиях недифференцированные клетки 3T3T обрабатывали антисмысловыми (5'-CAGCAGGAGCTGTGTT-3 ') или смысловыми (5'-CTACTAAGCCATCGGC-3') олигонуклеотидами на основе кДНК P2P-R в разное время, чтобы определить, действительно ли P2P выражение может быть выборочно подавлено.Олигонуклеотиды были получены как в Детской исследовательской больнице Св. Джуда (Мемфис, Теннесси), так и в Биосинтезе (Льюисвилл, Техас). Покоящиеся недифференцированные клетки 3T3T получали путем культивирования в среде DMEM, содержащей 0,5% бычьей телячьей сыворотки, в течение 3-4 дней при низкой плотности клеток, то есть 1 × 10 4 клеток на см 2 .

    Линия гемопоэтических стволовых клеток человека К-562 также хорошо охарактеризована (15). Эти клетки выращивали в виде суспензионных культур в среде RPMI 1640 с добавлением 10% бычьей телячьей сыворотки.

    Дифференциация клеток.

    Процедура индукции дифференцировки клеток 3T3T в адипоциты была описана ранее (16). Можно получить высокообогащенные популяции клеток на различных стадиях дифференцировки адипоцитов, используя хорошо задокументированные условия культивирования и реагенты (1, 14, 16). Эти методы были использованы для подготовки популяций клеток для текущих исследований.

    Приготовление клеточных лизатов.

    Клеточные лизаты получали, как описано Kaelin et al. (17). Растущие мышиные клетки BALB / c 3T3T и человеческий K562 дважды промывали ледяным PBS (8 г NaCl, 0,2 г kcl, 1,15 г Na 2 HPO 4 · 7H 2 O и 0,2 г KH 2 PO 4 на литр H 2 O, pH 7,4) и лизировали в течение 30 минут при 4 ° C в ледяном буфере EBC (50 мМ Tris, pH 8,0 / 120 мМ NaCl / 0,5% Nonidet P-40/200 мМ ортованадат натрия), содержащий по 10 мкг / мл каждого из ингибиторов протеаз апротинин, лейпептин и фенилметилсульфонилфторид (Sigma).Лизаты очищали от клеточного дебриса центрифугированием при 14000 × g в течение 15 минут при 4 ° C.

    Клонирование и секвенирование кДНК P2P-R.

    Для клонирования последовательностей P2P-R олиго (dT) произвольно праймированную библиотеку экспрессии кДНК мышиного фибробласта 3T3 λgt11 (CLONTECH) подвергали скринингу с использованием стандартных процедур (18) с использованием моноклональных антител AC88 или FA12. Антитело AC88, генерируемое против белка теплового шока 90 (hsp90), перекрестно реагирует с белками P2P и было описано ранее (19).FA12 также распознает P2P и был получен против белков ядра hnRNP (20). Клоны, положительные как по AC88, так и по FA12, были идентифицированы и выделены с помощью нескольких раундов очистки бляшек. Полученные кДНК P2P-R были субклонированы для дидезоксинуклеотидного секвенирования обеих цепей (21).

    Дополнительные 5'-последовательности P2P-R были клонированы с использованием метода быстрой амплификации концов кДНК (5'-RACE) (22). Для RACE использовали ген-специфические олигонуклеотиды для праймирования синтеза кДНК первой цепи из тотальной РНК 3T3T мыши с использованием набора цикла кДНК (Invitrogen), а 5'-RACE выполняли с использованием различных наборов праймеров.Амплифицированные продукты характеризовали анализом размера и клонировали, а также определяли их последовательности ДНК. На протяжении этой процедуры секвенирования выполнялись периодические поиски в базах данных ДНК с помощью программ BLAST на предмет связанных последовательностей. Когда мы завершали секвенирование 5'-конца кДНК P2P-R, была обнаружена одна значительная гомология. Было обнаружено, что кДНК человека, обозначенная RBQ1 (23), имеет обширную гомологию с 5'-областью кДНК мышиного P2P-R. Следовательно, праймеры для самых 5'-доменов RBQ-1 также использовали для характеристики кДНК P2P-R с помощью ПЦР с обратной транскрипцией.

    Выделение РНК и Нозерн-анализ.

    Общую клеточную РНК выделяли из растущих клеток, покоящихся недифференцированных клеток, клеток в состоянии нетерминальной дифференцировки и терминально дифференцированных клеток. Общую клеточную РНК (20 мкг) из каждого образца денатурировали и фракционировали на гелях формальдегид / 1,2% агарозы и переносили на нитроцеллюлозные фильтры. Гибридизацию проводили в течение ночи при 42 ° C с использованием рандомизированных зондов 32 P-меченных кДНК P2P-R.После гибридизации фильтры промывали и подвергали авторадиографии с усиливающими экранами при -70 ° C. Тканеспецифическую экспрессию мРНК P2P-R определяли с использованием Нозерн-блоттинга нескольких тканей мыши (CLONTECH) в соответствии с протоколом производителя.

    Экспрессия слитого белка для продукции моноклональных антител.

    кДНК P2P-R клонировали в векторы pET5a, -b и -c с использованием стандартных процедур. Отдельные клоны, содержащие кДНК во всех шести возможных рамках считывания, использовали для последующего анализа.Экспрессия была достигнута с использованием процедуры, описанной Studier et al. (24). Для каждой из кДНК только одна рамка считывания, которая соответствовала наибольшей открытой рамке считывания (ORF), приводила к экспрессии гибридного белка, антигенно связанного с P2P. Эти слитые белки затем использовали для получения специфического моноклонального антитела против P2P-R, C130, в лаборатории гибридом Центра молекулярных ресурсов Университета Теннесси, Мемфис. Система бактериальной экспрессии, состоящая из серии экспрессионных векторов pET5, бактериофага CE6 и штамма HMS174 Escherichia coli , была щедрым подарком от F.W. Studier.

    Экспрессия слитых белков P2P-GST и 6 × -His-E1a.

    последовательностей кДНК P2P-R, кодирующих пептиды P2P-R, были получены с помощью ОТ-ПЦР и лигированы в вектор pGEX-KG для получения следующих слитых белков глутатиона S -трансферазы (GST) (конкретные аминокислотные остатки указаны в скобках) : GST – P2P- (1–332), GST – P2P- (494–688), GST – P2P- (753–909), GST – P2P- (918–1095) и GST – P2P- (1221–1384). ). Экспрессию и очистку слитых белков GST проводили, как описано (17, 25).

    Вектор E1a, используемый для экспрессии белка E1a в виде слитого белка 6 × -His, был щедрым подарком Маргарет Килан из Университета Теннесси, Мемфис. Экспрессию и очистку этого слитого белка проводили с использованием набора His-Bind Kit и следуя протоколу производителя (Novagen).

    Для анализа связанных бактериальных белков GST- или 6 × -His образцы кипятили в буфере для образцов 1 × SDS и анализировали электрофорезом в SDS / полиакриламидном геле, а затем белки визуализировали путем окрашивания кумасси синим.

    Анализ связывания pRb1 и иммунопреципитации.

    слитых белков GST-P2P экспрессировали и выделяли на гранулах глутатион-сефароза, как описано выше. Цельноклеточные лизаты клеток K562 (1 × 10 7 клеток на образец) встряхивали с шариками в течение 1 ч при 4 ° C, а затем пять раз промывали буфером NETN (17). Затем шарики кипятили в загрузочном буфере 1 × SDS, и белки разделяли на гелях SDS / полиакриламид и переносили на нитроцеллюлозные мембраны.Конкурентные эксперименты проводили путем добавления избытка слитого белка 6 × -His – E1a к клеточным лизатам перед добавлением слитых белков GST – P2P. Белок Rb1 визуализировали иммуноблоттингом с использованием антител против Rb1 IF8 или C15 (Santa Cruz Biotechnology). Эти антитела также использовали для иммунопреципитации нативного Rb1 из клеточных лизатов, чтобы служить в качестве положительного контроля, согласно протоколу производителя.

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Клонирование и характеристика P2P-родственной кДНК.

    Для клонирования родственной P2P кДНК библиотеку кДНК 3T3 λgt11 (CLONTECH) подвергли скринингу с использованием моноклонального антитела AC88, которое обнаруживает как P2P, так и hsp90 (7, 19). AC88-положительные клоны подвергали повторному скринингу с помощью моноклонального антитела FA12, которое было индуцировано против белков ядра hnRNP и ранее было показано, что оно реагирует с P2P (7, 20). Было обнаружено, что два независимых клона, обозначенные как клон A (1398 п.н.) и клон B (1943 п.н.), распознаются обоими антителами. Секвенирование нуклеотидов кДНК показало, что 3'-крайняя область клона A и самая 5'-крайняя область клона B были на 100% гомологичны по области 863 п.н., что позволяет предположить, что это перекрывающиеся клоны, происходящие от одного вида РНК.Перекрывающиеся клоны соединяли через уникальный сайт рестрикционной эндонуклеазы Hin dIII в перекрывающейся области с образованием клона кДНК длиной 2478 п.н. Это включает в себя ORF размером 1658 п.о. и 820 п.н. 3'-нетранслируемой последовательности.

    Дополнительный скрининг библиотеки кДНК с использованием этой кДНК в качестве зонда не дал новых клонов с какой-либо дополнительной 5'-последовательностью кДНК. Следовательно, клон кДНК удлиняли к 5'-концу с использованием методов RACE, посредством которых использовали ген-специфические олигонуклеотиды для примирования синтеза кДНК первой цепи из общей РНК 3T3T мыши, и выполняли 5'-RACE.Амплифицированные продукты клонировали и определяли их последовательности ДНК. Это расширило 5'-последовательность на 1015 п.н., и было обнаружено, что слитый белок GST-P2P, происходящий из этой области, связывает Rb1, как описано ниже.

    На протяжении процедуры секвенирования также проводился периодический поиск в базах данных ДНК с помощью программ BLAST для поиска родственных последовательностей, особенно тех, которые кодируют Rb1-связывающие домены. Одна значительная гомология с 5'-областью кДНК P2P-R была обнаружена с кДНК человека, обозначенной RBQ1 (23).Поэтому праймеры для RBQ1 использовали для дальнейшего удлинения последовательности кДНК P2P-R с использованием методов ОТ-ПЦР с получением кДНК P2P-R длиной 5173 п.н. (рис. 1).

    Модель кДНК P2P-R и выведенного из нее белка. КДНК P2P-R длиной 5173 п.о. содержит ORF длиной 4214 п.о. Также показаны домены выведенного 1404 аминокислотного белка, экспрессируемого как слитые белки. К ним относятся пять слитых белков GST-P2P и один слитый белок с β-галактозидазой, обозначенный как C130. В скобках указаны аминокислотные остатки каждого слитого белка.

    Анализ этой кДНК выявляет одну длинную ORF. Наличие двух стоп-кодонов в рамке считывания около 5'-конца и нескольких стоп-кодонов в рамке считывания на 3'-конце позволяет предположить, что кДНК содержит всю кодирующую область гена. Эта ORF может кодировать белок из 1404 аминокислот, имеющий прогнозируемую молекулярную массу 156,9 кДа (фиг. 2). Этот высокоосновной белок (pI, 9.6) имеет множество сигналов потенциальной ядерной локализации, что согласуется с нашими предыдущими выводами о том, что P2P представляют собой субнабор ядерных белков hnRNP (7).Кроме того, компьютерный анализ ORF, полученного из кДНК P2P-R, показывает уникальный богатый цистеином домен около аминоконца (аминокислоты 61–101), который очень напоминает консенсусную последовательность «кольцевого» класса Zn 2+. finger доменов (26) и другой домен около аминоконца (аминокислоты 79–97), который участвует в контроле клеточного роста, т.е. мотив последовательности клеточного деления (27).

    белка P2P-R, синтезируемого кДНК, состоящего из 1404 аминокислот. Связанный с hnRNP домен кодируется аминокислотами 853–1404, а Rb1-связывающий домен кодируется аминокислотами 753–908.Возможные сигналы ядерной локализации присутствуют между аминокислотами 717 и 1323 (подчеркнуты), и богатый цистеином домен, напоминающий «кольцевой» цинковый палец, также присутствует от аминокислоты 61 до аминокислоты 101 (выделено рамкой). Также показан мотив последовательности деления клетки от аминокислоты 79 до аминокислоты 97 (жирный шрифт).

    Экспрессия мРНК P2P-R во множественных тканях и репрессия посредством терминальной дифференцировки адипоцитов.

    Чтобы установить распределение в тканях и размер мРНК P2P-R, множественный тканевый Нозерн-блот мыши зондировали с помощью зонда кДНК P2P-R.Одна мРНК размером 8 т.п.н. была обнаружена во всех исследованных тканях. Очень низкие, но обнаруживаемые уровни мРНК P2P-R были обнаружены в почках, головном мозге и селезенке, тогда как умеренные уровни мРНК P2P-R были обнаружены в сердце, легких, печени и скелетных мышцах. Самые высокие уровни экспрессии мРНК P2P-R были обнаружены в семенниках (фиг. 3 A ). Использование зондов для разных 3 'и 5' доменов кДНК P2P-R обнаружило одну и ту же РНК размером 8 т.п.н. с помощью Нозерн-блоттинга (данные не показаны).

    Тканевое распределение мРНК P2P-R и ее специфическая репрессия за счет терминальной дифференцировки адипоцитов.( A ) Нозерн-блоттинг множественных тканей мышей (CLONTECH) анализировали с использованием 32 Р-меченных рандомизированных зондов кДНК P2P-R в условиях высокой жесткости. Маркеры размера в килобазах (кб) показаны слева. ( B ) Общая клеточная РНК (20 мкг), выделенная из растущих недифференцированных клеток 3T3T (RG), неподвижных недифференцированных клеток 3T3T с недостатком сыворотки (G s ), клеток 3T3T с задержкой преддифференцировки (G O / G D ), нетерминально дифференцированные адипоциты 3T3T (NTD) и терминально дифференцированные адипоциты 3T3T (TD) были гибридизированы с 32 P-меченными рандомизированными зондами кДНК P2P-R в условиях высокой жесткости.Показана мРНК P2P-R размером 8 т.п.н. (*). Фотография геля, окрашенного бромистым этидием, перед переносом нуклеиновой кислоты на нитроцеллюлозную мембрану показывает эквивалентные количества РНК в каждой полосе.

    Чтобы определить, влияет ли терминальная дифференцировка адипоцитов на экспрессию мРНК P2P-R, общую РНК выделяли из быстрорастущих клеток 3T3T, покоящихся недифференцированных клеток 3T3T, лишенных сыворотки крови, покоящихся предифференцированных клеток 3T3T, нетерминально дифференцированных адипоцитов 3T3T и терминально дифференцированных адипоцитов 3T3T. .Нозерн-анализ использовали для сравнения уровней мРНК P2P-R в клетках в этих состояниях. Фиг. 3 B показывает, что мРНК P2P-R размером 8 т.п.н. экспрессируется во всех образцах, за исключением тех, которые получены из клеток на терминальной стадии дифференцировки адипоцитов, где ее экспрессия заметно подавляется. Этот результат согласуется с нашими предыдущими выводами о том, что экспрессия белка P2P подавляется, когда мышиные мезенхимальные стволовые клетки 3T3T и нормальные кератиноциты человека необратимо теряют свой пролиферативный потенциал в связи с терминальной дифференцировкой (7) или старением (8).

    Доказательства того, что кДНК P2P-R кодирует пептиды с характеристиками hnRNP.

    Первое доказательство того, что пептиды, кодируемые кДНК P2P-R, связаны с hnRNP, было установлено тем фактом, что кДНК была выделена путем скрининга библиотеки экспрессии с двумя моноклональными антителами, которые обнаруживают основные белки hnRNP. Эти антитела, которые распознают различные эпитопы hnRNP, а также реагируют с нативными P2P, включают AC88 и FA12.

    Для дальнейшего установления связи между клонированной кДНК и коровыми белками hnRNP мы создали моноклональное антитело C130.Карбоксиконцевую часть ORF кДНК P2P-R (пары оснований 2695–4353) субклонировали в векторы экспрессии серии pET5. В этой системе кДНК помещали проксимально к сайту инициации трансляции гена 10 бактериофага Т7 таким образом, чтобы были выделены отдельные плазмиды, содержащие кДНК в каждой из шести рамок считывания в фазе с белковым продуктом гена 10. Только одна рамка считывания, которая соответствует 3'-концу большой ORF (фиг. 1), привела к экспрессии слитого белка, антигенно связанного с P2P.Слитый белок электроэлюировали из препаративных гелей и использовали для получения P2P-R-специфического моноклонального антитела в Университете Теннесси, Мемфис, Лаборатория гибридом Центра молекулярных ресурсов.

    Одна гибридома, полученная таким образом, была реактивной против очищенного слитого белка. Затем антитело, обозначенное C130, использовали для зондирования ядерных экстрактов 3T3T и всех клеточных экстрактов с помощью вестерн-блоттинга. На фиг. 4 показано, что моноклональное антитело C130 специфически обнаруживает нативные белки P2P способом, аналогичным паттерну, наблюдаемому для AC88.Однако C130 и AC88 распознают отдельные эпитопы, поскольку C130 обнаруживает только P2P, тогда как AC88 проявляет перекрестную реактивность с hsp90. Эти результаты показывают, что пептиды, производные от кДНК P2P-R, содержат по меньшей мере три эпитопа, ассоциированных с hnRNP, детектируемых моноклональными антителами AC88, FA12 и C130.

    Моноклональное антитело C130, полученное из слитого белка кДНК P2P-R, обнаруживает нативный P2P. Быстрорастущие недифференцированные общие (Т) клеточные экстракты (100 мкг на дорожку) или ядерные (N) экстракты (40 мкг на дорожку) разделяли на SDS / 10% полиакриламидных гелях и переносили на нитроцеллюлозные мембраны.Блоты зондировали моноклональным антителом AC88 для обнаружения нативных белков P2P или моноклональным антителом C130, полученным из кДНК P2P-R. Указаны положения белков P2P и hsp90. Нормы размеров указаны в килодальтонах.

    Затем мы оценили, могут ли слитые белки P2P-R связывать одноцепочечные нуклеиновые кислоты так же, как hnRNPs. Из пяти протестированных слитых белков (рис. 1) только два показали связывание с одноцепочечной ДНК. Из них GST – P2P- (1221–1384) показал самое высокое сродство.Более конкретно, значительное связывание одноцепочечной ДНК с этим слитым белком было обнаружено после последовательной промывки буфера 0,1 М NaCl, 0,1 М NaCl + 1 мг / мл гепарина и 0,2 М NaCl. Этот слитый белок GST – P2P- (1221–1384) был получен из 3'-конца P2P-R в той же области, которая кодирует антиген hnRNP, обнаруживаемый моноклональным антителом C130.

    Также были проведены исследования для определения эффекта антисмыслового олигонуклеотида, происходящего от кДНК P2P-R, на экспрессию нативных P2P.Результаты показывают, что когда недифференцированные клетки 3T3T обрабатывали 50 мкг / мл антисмысловой P2P-R, экспрессия hnRNP P2P от 35 до 40 кДа подавлялась на 83%. Это было определено денситометрическим анализом вестерн-блотов, окрашенных антителом AC88, который выявляет как hnRNP P2P, так и hsp90. Напротив, обработка клеток смысловым олигонуклеотидом P2P подавляла экспрессию P2P hnRNP на ≤6%, и ни антисмысловые, ни смысловые реагенты P2P-R не влияли на экспрессию hsp90.

    кДНК P2P-R кодирует пептид, связывающийся с Rb1.

    Из-за недавнего отчета, показывающего, что Rb1 необходим для терминальной дифференцировки мышечных клеток (10), и наших данных, показывающих, что экспрессия P2P модулируется во время терминальной дифференцировки адипоцитов, мы провели исследования, чтобы определить, могут ли продукты кДНК P2P-R взаимодействовать с Rb1. Для достижения этого слитые белки GST-P2P были продуцированы для разных доменов кДНК P2P-R. Клеточные лизаты получали из гемопоэтических стволовых клеток человека K-562, которые содержат большое количество белка Rb1, и эти лизаты затем осаждали каждым из четырех слитых белков GST-P2P - i.е., GST – P2P- (1–332), - (484–688), - (753–908) и - (918–1095), как показано на рис. 1. Лизаты также осаждали только белком GST. в качестве отрицательного контроля в этих экспериментах. Рис. 5 A демонстрирует, что один слитый белок, GST – P2P- (753–909), специфически осаждает белок, который обнаруживается антителом против Rb1 IF8.

    GST – P2P- (753–909) специфически связывает Rb1 через «карманный» домен. ( A ) Аликвоты общего клеточного лизата K562 (1 × 10 7 клеток на образец) инкубировали с лидерной последовательностью GST или с GST – P2P- (1–332), GST – P2P- (494–688). ), GST – P2P- (918–1095) или GST – P2P- (753–909).В качестве контролей преципитации аликвоты лизата K562 подвергали иммунопреципитации с помощью антитела против Rb1 IF8 или нормальной кроличьей сыворотки. Связанные белки разделяли электрофорезом в SDS / 7% полиакриламидном геле и переносили на нитроцеллюлозу. Аликвоту неочищенного лизата К-562 включали в качестве положительного контроля для Вестерн-блоттинга. Белки визуализировали путем зондирования антителами против Rb1 IF-8 или C15. ( B ) Связывание GST – P2P- (753–909) с Rb1 блокируется конкуренцией с белком E1a.Аликвоты лизата K562 инкубировали, как указано выше, с GST или GST – P2P- (752–909) в присутствии (+ E1a) или в отсутствие (-E1a) очищенного белка аденовируса E1a. Связанные белки разделяли электрофорезом в SDS / 7% полиакриламидном геле и переносили на нитроцеллюлозу. Белки визуализировали путем зондирования антителами против Rb1 IF8 или C15.

    Большинство белков, которые связаны с Rb1, связываются с областью Rb1, которая была названа «карманным» доменом (28). Чтобы определить, происходит ли взаимодействие между Rb1 и GST – P2P- (753–909) через домен кармана Rb1, были проведены конкурентные эксперименты с использованием очищенного вирусного белка E1a.Известно, что E1a специфически связывается с доменом кармана Rb1 и ингибирует связывание клеточных белков с этой областью (29). Рис. 5 B показывает, что взаимодействие между слитым белком GST – P2P- (753–909) и Rb1 блокируется добавлением очищенного белка E1a. Это ингибирование специфично для белка E1a, потому что добавление другого белка, дигидрофолатредуктазы, не блокирует взаимодействие Rb1 и слитого белка GST-P2P (данные не показаны). Следовательно, GST – P2P- (753–909) специфически связывается с Rb1 посредством взаимодействия с доменом кармана Rb1.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Доказательства того, что необратимая потеря пролиферативного потенциала связана с репрессией экспрессии hnRNP-ассоциированных белков, участвующих в процессинге РНК, были опубликованы нашей исследовательской группой в 1989 г. (7). Мы специально продемонстрировали, что терминальная дифференцировка адипоцитов 3T3T коррелирует с заметно сниженной экспрессией набора белков, обозначенных P2P. Было показано, что P2P-серверы имеют pI более 9.0, иметь размер от 35 до 40 кДа и локализоваться на ядерных частицах hnRNP, как определено с использованием методов седиментации в градиенте сахарозы. Дополнительные исследования установили, что P2P распознаются моноклональным антителом FA12, которое обнаруживает очищенные ядерные белки hnRNP. Результаты двумерного гель-электрофореза дополнительно установили, что P2P являются белками hnRNP типа A / B. P2P также имеют общий эпитоп с hsp90, как определено с помощью моноклонального антитела AC88, даже если P2P не являются белками теплового шока.Впоследствии было показано, что терминальная дифференцировка кератиноцитов человека также связана с заметным снижением экспрессии P2P (7), а экспрессия P2P заметно снижается в связи со старением нормальных клеток человека (8).

    В этой статье описывается клонирование и характеристика родственной P2P кДНК P2P-R. В результате этого исследования была определена кДНК длиной 5173 п.н., содержащая ORF размером 4214 п.о., кодирующую высокоосновной (pI, 9,6) белок 156,9 кДа. Зонды кДНК P2P-R обнаруживают одну мРНК размером 8 т.п.н. в почках, печени, семенниках, легких и других тканях мышей, а также в растущих мезенхимальных стволовых клетках 3T3T.Напротив, экспрессия мРНК P2P-R заметно снижается, когда клетки 3T3T проходят терминальную стадию в процессе дифференцировки адипоцитов. Однако экспрессия мРНК P2P-R не подавляется в нетерминально дифференцированных адипоцитах, что позволяет предположить, что регуляция экспрессии P2P-R специфически связана с терминальной дифференцировкой. Это коррелирует с нашими предыдущими открытиями, что нативная экспрессия P2P также избирательно подавляется терминальной дифференцировкой (7).

    Эта статья также устанавливает, что кДНК P2P-R кодирует домены для ассоциации hnRNP.Мы впервые показали, что продукт кДНК P2P-R содержит три различных эпитопа, общих с коровыми белками hnRNP. К ним относятся эпитопы, распознаваемые моноклональными антителами AC88, FA12 и C130. Слитые белки GST – P2P- (1221–1384) также связывают одноцепочечную нуклеиновую кислоту, как и hnRNPs. Данные, показывающие, что обработка клеток антисмысловым олигонуклеотидом, производным от кДНК P2P-R, подавляет нативную экспрессию P2P, предполагают тесную связь продуктов кДНК P2P-R с hnRNP. Эта связь может быть результатом нескольких возможностей.Мы поддерживаем возможность того, что кДНК P2P-R непосредственно кодирует P2P от 35 до 40 кДа за счет взаимоотношений предшественник-продукт. Однако мРНК P2P-R может иметь гомологию нуклеотидной последовательности в области, которая распознается антисмысловым олигонуклеотидом, с другой мРНК, кодирующей P2P от 35 до 40 кДа. Также возможно, что кДНК P2P-R может кодировать белок, который регулирует экспрессию нативных P2P от 35 до 40 кДа, так что, когда антисмысловой P2P-R репрессирует уровни белка P2P-R, снижается регуляция 35-40 кДа белка. кДа белков P2P.

    Затем были проведены исследования, чтобы определить, может ли Rb1 взаимодействовать с продуктами кДНК P2P-R. На эту возможность указывают данные, показывающие, что Rb1 участвует в терминальной дифференцировке и в др. Механизмах контроля роста. Доказательства того, что кДНК P2P-R кодирует Rb1-связывающий белок, были получены путем анализа характеристики связывания Rb1 слитых белков GST-P2P. Было показано, что GST-P2P- (753–909) связывает Rb1. Тот факт, что связывание Rb1 с этим гибридным белком специфически блокируется конкуренцией с E1a, предполагает, что связывание происходит с доменом кармана Rb1 (28, 29).Эти данные совместимы с данными, касающимися кДНК RBQ1, которая была выбрана на основе ее способности связывать Rb1 и того факта, что кДНК RBQ1 демонстрирует значительную гомологию с 5'-частью кДНК P2P-R (23).

    Выведенный продукт кДНК P2P-R содержит дополнительные интересные домены. Первым из них является мотив последовательности клеточного деления, который, как предполагается, является характеристикой белков, участвующих в регуляции клеточного деления (27). Примеры белков, которые содержат этот мотив, включают cdc25, c-myc и несколько вирусных белков, включая E1a, E7 и большой Т-антиген вируса обезьяны 40.Присутствие мотива последовательности клеточного деления в продукте кДНК P2P-R согласуется с данными, показывающими, что P2P участвуют в регуляции пролиферативного потенциала клетки. 5'-часть кДНК P2P-R также кодирует богатую цистеином область, которая связана с «безымянными» цинковыми пальцами (30). Считается, что домены цинковых пальцев определяют характеристики конформации белков, которые участвуют в связывании нуклеиновых кислот и белок-белковых взаимодействиях. Эти атрибуты совместимы с тем фактом, что продукты P2P и P2P-R связываются с одноцепочечной ДНК и что P2P связываются с hnRNP (31).

    Эти данные вместе предполагают, что кДНК P2P-R может кодировать белковые домены, которые важны для контроля роста и которые можно модулировать путем дифференцировки. Тот факт, что продукты кДНК P2P-R могут связывать Rb1, очень важен, особенно потому, что недавно было показано, что как белки-супрессоры опухоли Rb1, так и WT1 локализуются в сайтах процессинга РНК, как и P2P (12, 13). Кроме того, способность Rb1 связываться с белками ядерного матрикса (12, 13), такими как p84 (12) и ламин A (32), представляет интерес, поскольку известно, что частицы hnRNP также связаны с ядерным матриксом (33). ).

    На основании этих результатов мы предполагаем, что способность Rb1 и, возможно, других белков-супрессоров опухолей влиять на котранскрипционную или посттранскрипционную регуляцию экспрессии РНК может опосредоваться посредством взаимодействий с продуктами гена P2P-R. Если это подтвердится, эти генные продукты P2P-R будут иметь решающее значение во многих биологических и патологических процессах, включая контроль роста, дифференциацию, подавление опухоли и канцерогенез.

    Благодарности

    Мы благодарим Робина Кокса за техническую помощь и профессиональный вклад ряда партнеров, включая докторов.Д. Тофт, П. Мину, Л. Соломон и В. Салливан, которые помогали с различными аспектами этого сложного проекта клонирования. Это исследование финансировалось кафедрой передового опыта в Мюрхеде компании R.E.S. и Фондом исследований рака Гервина.

    Примечание добавлено в доказательство.

    Пока эта работа находилась на рассмотрении, высокогомологичная последовательность кДНК была депонирована в базе данных GenBank (номер доступа U28789U28789). Было установлено, что эта кДНК кодирует пептиды, способные связывать белок-супрессор опухоли р53.

    Сноски

    • Дэвид Прескотт, Университет Колорадо, Боулдер, Колорадо

    • Сокращения: P2P, протеины потенциала пролиферации; hnRNP, гетерогенный ядерный рибонуклеопротеин; P2P-R, связанный с протеином потенциальной пролиферации; GST, глутатион S -трансфераза; RACE - быстрая амплификация концов кДНК; ORF, открытая рамка считывания; hsp90, белок теплового шока 90.

      Депонирование данных: Последовательность, указанная в этой статье, была депонирована в базе данных GenBank (номер доступа.U83913U83913).

    • Получено 13 августа 1996 г.
    • Принято 3 декабря 1996 г.
    • Авторские права © 1997, Национальная академия наук США

    Программа взаимного наставничества (P2P)

    P2P является Программа удержания открыта для всех студентов, но ориентирована на студентов, которые традиционно недопредставлены в областях STEM. Эти группы включают афроамериканцев, испаноязычных / латиноамериканцев и коренных американцев / жителей островов Тихого океана. P2P открыт для всех студентов дневных отделений вычислительных, инженерных и научных колледжей.

    Отличительной чертой P2P является многоуровневая программа наставничества, которая включает двухмесячные встречи, посвященные темам профессионального развития, доступу к корпоративным спонсорам, подготовке к аспирантуре, научным исследованиям преподавателей, ресурсам кампуса и академическому обогащению. Студенты будут распределены в небольшие группы взаимного наставничества на основе основных и аналогичных профессиональных и академических целей.

    ПРИМЕЧАНИЕ: Все должности наставника требуют собеседования.Ученые-исследователи и наставники финансируются программой LSAMP, должны предоставить доказательство участия в исследованиях на уровне бакалавриата и иметь дополнительные программные требования, как указано ниже.

    Требования к участию в многоуровневой программе наставничества P2P:

    Научные наставники
    1. Студенты высшего уровня, студенты дневной формы обучения.
    2. Минимальный совокупный средний балл 3.0.
    3. Обязательное присутствие на собраниях раз в два месяца.
    4. Активно занимается исследованиями в бакалавриате (требуется подтверждение).
    5. Назначен наставником группы из 3-5 студентов по аналогичной специальности и / или с аналогичными долгосрочными образовательными и карьерными целями. Предоставление ресурсов кампуса, академической поддержки и социальной интеграции по мере необходимости.
    6. Посещение конференции новаторов STEM в Саванне, штат Джорджия, 6-8 октября 2016 г. (командировочные расходы покрываются программой LSAMP).
    7. Заполнение ежемесячных отчетов о наставничестве (3 / семестр) для представления сотрудникам программы.
    8. Проводит дополнительные групповые встречи с подопечными (3 / семестр) помимо встреч P2P.

    Наставники
    1. Старшие классы, студенты дневной формы обучения.
    2. Минимальный совокупный средний балл 3.0.
    3. Обязательное присутствие на собраниях раз в два месяца.
    4. Наставник группы из 3-5 студентов по аналогичной специальности и / или с аналогичными долгосрочными образовательными и карьерными целями. Предоставление ресурсов кампуса, академической поддержки и социальной интеграции по мере необходимости.
    5. Заполнение ежемесячных отчетов о наставничестве (3 / семестр) для представления сотрудникам программы.
    6. Проводит дополнительные групповые встречи с подопечными (3 / семестр) вне встреч P2P.

    Ученые-исследователи
    1. Студенты дневной формы обучения с совокупным средним баллом не менее 2,5.
    2. Обязательное присутствие на собраниях раз в два месяца.
    3. Активно занимается бакалавриатом.
    4. Рекомендуется представлять исследования на одной национальной конференции в течение учебного года (при наличии финансирования).
    5. Посещение конференции новаторов STEM в Саванне, штат Джорджия, 6-8 октября 2016 г. (командировочные расходы покрываются программой LSAMP).
    6. Регулярное общение с назначенным наставником.
    7. Посещение ежемесячных собраний малых групп по расписанию.

    Подопечные
    1. Студенты дневной формы обучения с совокупным средним баллом не менее 2,5.
    2. Обязательное присутствие на собраниях раз в два месяца.
    3. Регулярное общение с назначенным наставником.
    4. Посещение ежемесячных собраний малых групп по расписанию.

    Associates
    1. Студенты дневной формы обучения.
    2. Нет требований к минимальному баллу успеваемости.
    3. Открыт для студентов, которые не приняты на финансируемую должность.
    4. Доступ к наставничеству и семинарам.
    5. Возможность перейти на финансируемую должность при наличии свободных мест или при условии, что учащийся соответствует критериям отбора.

    Аспиранты-наставники
    1. Студенты магистратуры или докторантуры в колледжах вычислительной техники, инженерии и естественных наук.
    2. Управляет группой наставников из 3-5 студентов бакалавриата.
    3. Предоставляет 5-10 часов в месяц наставничества, включая:
    a. Чтение ежемесячных отчетов о наставничестве, которые представляют наставники бакалавриата (3 / семестр)
    b.Проведение одного семинара / семестра, связанного с подготовкой к аспирантуре
    c. Репетиторство студентов бакалавриата в ресурсном центре CEED

    Приложение P2P ОТКРЫТО

    .

    Нажмите здесь, чтобы РЕГИСТРАЦИЯ

    Microsoft Word - P2PWeb-ICCIT.doc

    % PDF-1.4 % 1 0 объект > эндобдж 6 0 obj /Заголовок /Тема / Автор /Режиссер / Ключевые слова / CreationDate (D: 20210807145724-00'00 ') / Appligent (пакет StampPDF 5.1 18 января 2010 г., 9.0.1) / ModDate (D: 20130710100739-04'00 ') >> эндобдж 2 0 obj > эндобдж 3 0 obj > эндобдж 4 0 obj > эндобдж 5 0 obj > транслировать заявка / pdf

  • majoud
  • Microsoft Word - P2PWeb-ICCIT.doc
  • 2013-05-10T09: 17: 07-03: 00PrimoPDF http: //www.primopdf.com2013-07-10T10: 07: 39-04: 002013-07-10T10: 07: 39-04: 00 Пакет приложений StampPDF, версия 5.1uuid: 20c1842b-dd1c-4666-9a7d-a9c754f05effuuid: 8e647536-1dd2-11b2-0a00-2800e82fd9bfStampPDF Пакет 5.1 18 января 2010 г., 9.0.1 конечный поток эндобдж 7 0 объект > эндобдж 8 0 объект > эндобдж 9 0 объект > эндобдж 10 0 obj > эндобдж 11 0 объект > эндобдж 12 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC / ImageB / ImageI] >> эндобдж 13 0 объект > транслировать x ڝ XɎ $ '+: `JuȾYCg ה / Ys; Ȫ (U A, Gu ~ ɰTR / 3} O? 0 |? Ӛ}] Kk, 叓 ss ~ s) H = 蝃 +} gu, CJ #> \ @ & @}?] ~ | ~ ÒkJFZ% U " iJ6oo "l: $ @ # Gr (] A + [wI G wkuKist + Bl> fVWZ> @ s / '] Vm-M_uJ I> D = 4XC! XSaOdg # U [QkC91IdE8

    .
    alexxlab

    *

    *

    Top