Авансовый платеж по 44 фз какая статья: Авансирование по 44-ФЗ и 223-ФЗ

Содержание

Обеспечение исполнения контракта по 44-ФЗ для СМП в 2021 году на Avansa

Обеспечение исполнения контракта 44-ФЗ для СМП

Начиная с июля 2019 года, вступили в силу изменения Федерального Законодательства, принятые 1 мая. Они коснулись положений о контрактной системе в направлении оформления процедуры предоставления обеспечения исполнения контракта 44-ФЗ для СМП (субъектов малого предпринимательства).

Заключение сделки по итогам определения исполнителей, где участвовали социально-ориентированные некоммерческие организации и СМП, обеспечивается в проценте не от НМЦК, а от суммы, по которой предстоит подписание контракта. Она не может быть меньше размера авансового платежа.

Особенности обеспечения 44-ФЗ при участии субъектов малого предпринимательства

Гарантийное обязательство может предоставляться как переводом установленной суммы на специальный счет, указанный заказчиком, так и в формате поручительства третьей стороны — банковской гарантии 44-ФЗ.

В 2021 году возможно также освобождение этих категорий субъектов от уплаты обеспечения. Для этого участник предоставляет информацию из реестра контрактов заказчиков, чтобы подтвердить, что им были исполнены взятые обязательства на протяжении 3 лет до момента подачи текущей заявки на участие. Нужно подготовить данные по 3 контрактам в этот период, по которым не были применены неустойки, пени или штрафные санкции. При этом в сумме их расценки должны быть равными или выше НМЦК по извещению о рассматриваемой закупке.

Чтобы банковская гарантия была подобрана на самых выгодных условиях, рекомендуем рассмотреть несколько предложений с помощью онлайн-сервиса Avansa. Это отличная площадка для автоматического анализа и сравнения альтернатив. Понятный калькулятор позволит без проблем рассчитать стоимость гарантии по отдельным банкам. Вы сможете подобрать оптимальные варианты на основе экспертной информации.

Порядок оплаты электроэнергии: законно ли требование аванса?

Электроснабжающая организация требует произвести авансовый платёж за электроэнергию. Но, согласно Гражданскому кодексу РФ, потребитель обязан оплачивать объём электроэнергии, который принял фактически. Вправе ли ресурсоснабжающая организация настаивать на авансе?

В сегодняшней статье мы разберёмся, какие документы регламентируют порядок оплаты электроэнергии и можно ли этот порядок изменить.

Нормативные порядок и сроки оплаты

По общему правилу, установленному ст. 544 Гражданского кодекса РФ, оплата энергии производится за фактически принятое абонентом количество энергии в соответствии с данными учёта энергии, если иное не предусмотрено законом, иными правовыми актами или соглашением сторон. Порядок расчётов за потребленную энергию определяется законом, иными правовыми актами или соглашением сторон. Иными словами, абонент платит по факту потребления энергии в соответствии с порядком, который предусмотрен нормативным актом или договором между энергоснабжающей организацией и абонентом.

Нормативный порядок оплаты электроэнергии гарантирующему поставщику электрической энергии установлен Основными положениями функционирования розничных рынков электрической энергии, утверждёнными Постановлением Правительства РФ от 04.05.2012 N 442.

В соответствии с п.п. 40, 44, 65 (1), 79 Основных положений N 442 поставка электроэнергии разбивается на расчётные периоды, равные одному месяцу. Определение объёма взаимных обязательств поставщика и потребителя электроэнергии, в том числе объёма поставленной энергии и её стоимости, осуществляется по итогам каждого расчётного периода.

Сроки оплаты зависят от того, кто приобретает электроэнергию по договору электроснабжения:

Исполнители коммунальной услуги (УО, ТСЖ, ЖК, ЖСК) обязаны вносить оплату стоимости поставленной за расчётный период электроэнергии до 15-го числа месяца, следующего за расчётным периодом. Аналогичное правило закреплено в п. 25 Правил, обязательных при заключении договоров снабжения коммунальными ресурсами N 124.
Для иных лиц предусмотрено два промежуточных авансовых платежа за электроэнергию: до 10-го и до 25-го числа расчётного месяца, то есть месяца, в котором осуществлялась поставка энергии (п. 82 Основных положений N 442). Заметим, что речь идёт именно об авансе, а не о предоплате 100% стоимости.

До 10-го числа вносится 30% стоимости договорного объёма потребления электроэнергии в месяце, за который осуществляется оплата.

До 25-го числа вносится 40% стоимости договорного объёма потребления.

До 18-го числа месяца, следующего за расчётным, вносится окончательный платёж за полученную энергию. Фактически поставленный объём оплачивается третьим платежом.

Чтобы рассчитать размер авансовой оплаты, оплачиваемый объём электроэнергии принимается равным объёму потребления электроэнергии за предшествующий расчётный период, то есть за прошлый месяц.

Тарифы ЖКХ выросли с 1 июля 2017 года

Позиция суда относительно изменения порядка оплаты

Уралводоканал просил суд утвердить редакцию договора энергоснабжения со сроком оплаты электроэнергии до 15-го числа месяца, следующего за расчётным периодом. Организация ссылалась на то, что является слабой стороной в отношениях по поставке электроэнергии и нуждается в особой охране и защите, поскольку она единственный поставщик по отпуску питьевой воды и принятию сточных вод на территории г. Добрянка Пермского края.

Суд отказал в удовлетворении требования и установил авансовую систему оплаты, указав на то несколько причин:

такая система предусмотрена нормативным актом,
норма является диспозитивной, то есть предписание применяется, если соглашением сторон не предусмотрено иное, а соглашение о неприменении соответствующей нормы сторонами не достигнуто,
потребитель не является исполнителем коммунальных услуг (Постановление ФАС Уральского округа от 13.03.2014 по делу № А50-13241/2013).

Договорный порядок оплаты

Гражданский кодекс РФ закрепляет принцип свободы договора и устанавливает, что условия договора определяются по усмотрению сторон кроме случаев, когда содержание соответствующего условия предписано законом и иными правовыми актами. Такими правовыми актами являются императивные нормы, то есть правила, не подлежащие изменению по усмотрению сторон и действующие в момент заключения договора (п. 4 ст. 421 и ст. 422 ГК РФ).

Порядок оплаты электроэнергии установлен диспозитивными нормами постановлений Правительства РФ N 442 и N 124. Законодатель разрешил изменять сроки оплаты на более поздние даты по договорённости между сторонами (абз. 2 п. 81 Основных положений N 442, п. 25 Правил N 124). Относительно изменения сроков оплаты на более ранние даты законодатель ничего не сказал. В данном случае следует исходить из императивности правил об оплате электроэнергии, выбирая исключительно между двумя моделями:

нормативные сроки оплаты, установленные постановлениями Правительства РФ N 442 и N 124;
или договорные сроки с указанием более поздних дат оплаты, нежели установлены постановлениями Правительства РФ N 442 и N 124.

Если стороны не могут договориться о сроках оплаты электроэнергии, их спор должен быть передан на рассмотрение суда. При рассмотрении подобного спора суды основываются на балансе интересов сторон. Как показывает практика, суды изменяют сроки оплаты в том случае, если это необходимо для устранения неравенства и разногласий между сторонами относительно объёмов поставленной электроэнергии.

Как решаются споры, связанные с платой за ЖКХ: обзор судебной практики

Позиция суда относительно изменения сроков оплаты

В суде рассматривался спор между ТСЖ и АО «Мариэнергосбыт» о согласовании условия договора энергоснабжения по срокам оплаты электроэнергии, поступающей в МКД. Несмотря на наличие нормативного правила о сроке оплаты электроэнергии до 15-го числа месяца, следующего за расчётным периодом, суд установил срок оплаты ТСЖ электроэнергии – до 25-го числа месяца, следующего за расчётным периодом. Основанием принятия подобного решения послужило следующее обстоятельство: поставка электроэнергии собственникам жилых и нежилых помещений на индивидуальное потребление осуществлялась по прямым договорам, с ТСЖ спорный договор был заключён лишь на объём электроэнергии, поступающий на общедомовые нужды. Как отметил суд, обязательство собственников помещений по оплате электроэнергии совпадает с датой оплаты Товариществом электроэнергии АО «Мариэнергосбыт». Для соблюдения баланса интересов сторон требуется согласовать срок оплаты – до 25 числа (Постановление Арбитражного суда Волго-Вятского округа от 14.04.2015 по делу N А38-535/2014).

При заключении договора между УО и энергоснабжающей организацией возникли разногласия по вопросу об определении сроков исполнения обязательства по оплате электроэнергии. Суд учёл возможность изменения срока оплаты электроэнергии на более поздний – до 22-го числа месяца, следующего за расчётным периодом, основываясь на п. 5 Постановления Правительства РФ от 28.03.2012 N 253, а также учитывая сроки оплаты гражданами коммунальных услуг и сроки перечисления банком УО полученных от них денежных средств (Постановление ФАС Волго-Вятского округа от 26.02.2014 по делу N А28-5906/2013).

В целях соблюдения интересов и баланса сторон, учитывая сроки оплаты коммунальных услуг гражданами и сроки перечисления банком денежных средств граждан УО, принимая во внимание количество находящихся в управлении УО жилых домов, суды посчитали возможным установить срок оплаты электроэнергии до 18-го числа месяца, следующего за расчётным (Постановление Арбитражного суда Поволжского округа от 28.06.2016 по делу N А12-43813/2015).

Учитывая большой объём ежемесячно проверяемой информации, связанной с обслуживанием УО значительного количества МКД (185) и принимая во внимание необходимость осуществления УО деятельности по взысканию задолженности с потребителей в судебном порядке, а также учитывая иные обстоятельства, суды посчитали возможным утвердить редакцию условия договора о сроках оплаты, предложенную УО: «до 25-го числа месяца, следующего за расчётным» (Постановление Арбитражного суда Поволжского округа от 16.06.2016 по делу N А12-38064/2015).

Выводы

1) Авансовые платежи за электроэнергию, предусмотренные в п. 82 Основных положений N 442, не могут применяться к исполнителям коммунальной услуги, поскольку для них предусмотрены иные сроки оплаты – до 15-го числа месяца, следующего за расчётным периодом, или более поздний срок, согласованный договором или определённый судом.

2) Иные абоненты (например, собственники нежилых помещений, РСО), для которых предусмотрена авансовая схема платежей за электроэнергию в виде двух промежуточных платежей до 10-го и до 25-го числа расчётного месяца, могут её изменить в договорном порядке на более поздние сроки. Исходя из практики, подобное представляется маловероятным.

3) Электроснабжающая организация не вправе требовать предоплаты, то есть 100 % оплаты за фактически непредоставленную в пользу абонента энергию.

Ответственность за просрочку оплаты электроэнергии

В случае, когда абонент своевременно не оплачивает фактически принятую электроэнергию, переданную через присоединенную электрическую сеть, к абоненту в соответствии с п. 3 ст. 486, абз. 1 п. 4 ст. 488 ГК РФ применяются меры ответственности. На сумму, уплата которой просрочена, абонент обязан уплатить неустойку, размер которой определён п. 2 ст. 37 Федерального закона от 26.03.2003 N 35-ФЗ «Об электроэнергетике».

Размеры неустойки за просрочку оплаты электроэнергии
Электроснабжающая организация, гарантирующий поставщик	Управляющие организации, теплоснабжающие организации (единые теплоснабжающие организации), организации, осуществляющие ГВС, ХВС и (или) водоотведение	с 1 по 60 день – 1/300с 61 по 90 день – 1/170с 91 и дня и далее – 1/130
	ТСЖ, ЖК, ЖСК и иные специализированные кооперативы; Собственники и иные законные владельцы помещений в МКД	с 1 по 30 день – 0с 31 по 90 день – 1/300с 91 дня и далее – 1/130
	Иные абоненты (организации, предприниматели)	1/130 с первого дня просрочки

Ответственность за просрочку оплаты электроэнергии в виде неустойки для всех абонентов и исполнителей коммунальных услуг и/или в виде ограничения/приостановления предоставления электроэнергии за исключением УО, ТСЖ, ЖК, ЖСК и отдельной категории абонентов может наступить лишь в случае просрочки оплаты переданной электроэнергии, то есть за фактически принятое, но не оплаченное получателем количество энергии за месяц при наступлении срока окончательного расчета. Для целей расчётов и применения мер ответственности юридический факт передачи электроэнергии возникает по окончании расчётного периода в момент фиксации объёма поставки (п. 54 Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 24.03.2016 N 7). Для исполнителей коммунальной услуги (УО, ТСЖ, ЖК, ЖСК) этот момент определяется 15-го числа месяца, следующего за расчётным периодом. Для иных лиц – 18-го числа месяца, следующего за расчётным периодом, если иные сроки не были предусмотрены договором.

Таким образом, у электроснабжающей организации отсутствуют правовые основания применять меры ответственности (взыскивать неустойку, отключать электроэнергию) к абонентам, которые допускают просрочку авансовых или иных платежей до окончания расчётного периода.

Читайте, когда можно ограничивать коммунальные услуги должникам

Судебная практика по привлечению к ответственности за просрочку оплаты

Как разъяснил Верховный Суд РФ в Определении от 06.10.2016 N 305-ЭС16-8210, «поскольку факт поставки электроэнергии ни к 10-му, ни к 25-му числу расчётного месяца не подлежит фиксации и не был зафиксирован, обязанность компании оплатить предварительный платеж, исчисленный от ориентировочного объёма поставляемой электроэнергии за текущий месяц, не корреспондировала обязанности сбытовой компании поставить к этой дате определенное количество электроэнергии, несвоевременное осуществление первого и второго платежей не является достаточным основанием для привлечения компании к ответственности в соответствии со ст. 395 ГК РФ за просрочку оплаты поставленной электроэнергии».

Защита от незаконных требований электроснабжающей организации

Абонент, получивший требование об оплате электроэнергии в иные сроки, отличные от нормативных или договорных, действуя в порядке самозащиты (ст. 14 ГК РФ), может не производить оплату по указанному требованию, направить в адрес электроснабжающей организации претензию с указанием на незаконность действий и производить оплату в нормативные или договорные сроки.

Если электроснабжающая организация применяет к абоненту штрафные санкции или отключение в качестве меры ответственности за просрочку оплаты электроэнергии, УО, ТСЖ, ЖК, ЖСК могут обратиться за защитой своих прав в антимонопольный орган. Требования электроснабжающей организации в данном случае будут квалифицированы как противоречащие антимонопольному законодательству.

Узнайте, как рассчитать плату за коммунальный ресурс на содержание общего имущества

Автор статьи: Киракосян Сусана Арсеновна, кандидат юридических наук, доцент, доцент филиала КубГУ г. Новороссийска, партнёр юридической фирмы «Эсток-Консалтинг», независимый эксперт при Минюсте РФ по антикоррупционной экспертизе НПА.

Правительство временно разрешило увеличить размер авансирования по госконтрактам до 50%

Правительство РФ временно разрешило увеличить размер авансирования по госконтрактам до 50%, говорится в правительственном постановлении, опубликованном на сайте правительства РФ.

«Предприятия и компании, занимающиеся поставкой товаров, выполнением работ и оказанием услуг для госнужд, смогут получить в качестве аванса до 50% от цены контракта», – говорится в сообщении на сайте правительства.

Сам документ дополняет правительственное постановление о реализации федерального бюджета нормой, по которой главные распорядители средств федерального бюджета (и их подведомственные организации) смогут в 2020 году предусмотреть авансовые платежи по госконтрактам в объеме до 50% от цены контракта.

Эта же норма распространяется на субсидии из федерального бюджета бюджету того или иного субъекта РФ. При условии, что эти субсидии предназначены для финансирования работ в сфере строительства.

Еще одно положение правительственного постановления до конца текущего года приостанавливает действие нормы об авансировании госзакупок в размере до 30% от цены контракта.

Вопрос увеличения авансирования по госконтрактам до 50% от цены контракта поднимался ранее Минпромторгом в отношении закупок продукции российской промышленности, включая гражданскую продукцию предприятий оборонно-промышленного комплекса. После начала пандемии коронавирусной инфекции и введения в РФ режима самоизоляции стали говорить об увеличении авансирования по всем госзакупкам.

В частности, в середине апреля президент РФ Владимир Путин согласился с просьбой строительных компаний увеличить до 50% авансирование контрактов по инфраструктурным проектам.

«Прошу отдельно проработать вопрос увеличения авансов по контрактам в инфраструктурном строительстве. Сейчас авансируется 30% по контракту, предлагаю увеличить эту долю до 50%», – говорил Путин на совещании по ситуации в строительной индустрии.

Помимо этого в апреле Минфин подготовил поправки к закону «О контрактной системе» (44-ФЗ), одна из которых предполагает возможность выплаты аванса в размере более 30% от цены контракта. В случае, если размер обеспечения исполнения контракта соответствует размеру аванса. За исключением случаев, когда контракт находится на казначейском сопровождении (размер обеспечения составляет до 10%). Более того, размер обеспечения контракта при казначейском сопровождении аванса уменьшается и исчисляется от цены контракта, уменьшенной на размер такого аванса.

Эти поправки были приняты и вступили в силу в апреле.

Внесение изменений в законодательство о государственных закупках в соответствии с Федеральным законом от 25.07.2012 г. 44-ФЗ вызвано пандемией COVID-19

«Пепеляев Групп» информирует о предпринимаемых мерах по внесению изменений в законодательство о государственных закупках.

В сложной эпидемиологической ситуации, вызванной распространением новой коронавирусной инфекции, органами государственной власти принимаются меры по внесению изменений в Федеральный закон от 5 апреля 2013 г. № 44-ФЗ «О контрактной системе в сфере закупок товаров, работы и услуги по обеспечению государственных и муниципальных нужд »(« Закон №44-ФЗ »).

Процедура закупки будет упрощена в случае возникновения форс-мажорных обстоятельств и чрезвычайного положения.

В письме № IA / 21684/20 от 18 марта 2020 года Федеральная антимонопольная служба признала пандемию коронавируса обстоятельством непреодолимой силы, которое необходимо принять во внимание лицам, рассматривающим жалобы, дела об административных правонарушениях и заявления для юридических лиц. внесены в реестр недобросовестных поставщиков, а также аудиторами.

Кроме того, в письме уточняется, что на основании статьи 93 (1) (9) Закона № 44-ФЗ клиенты могут покупать у одного поставщика (подрядчика или поставщика услуг), если существует причинно-следственная связь между видами деятельности. направленная на предотвращение, предотвращение и ликвидацию последствий распространения коронавирусной инфекции и приобретаемого товара.

19 марта 2020 года Министерство финансов опубликовало Письмо № 24-06-06 / 21324 «О закупках у одного поставщика (подрядчика или поставщика услуг) при активации режима повышенной готовности», в котором Министерство финансов также:

заключает, что распространение новой коронавирусной инфекции носит чрезвычайный и неизбежный характер и, следовательно, является обстоятельством непреодолимой силы;
подтверждает право покупки у единственного поставщика;
указывает, что условие об отсутствии приобретенных товаров, работ и услуг в перечне товаров, работ и услуг, необходимых для оказания гуманитарной помощи или ликвидации последствий чрезвычайной ситуации, не применяется. ^{^[1]}.

Более подробные разъяснения содержатся в Федеральном законе № 98-ФЗ от 1 апреля 2020 года «О внесении изменений в отдельные положения законодательства Российской Федерации о предупреждении и ликвидации чрезвычайных ситуаций»

(«Федеральный закон № 98 -ФЗ »), который уже подписан Президентом России и регулирует отношения, возникающие в связи с необходимостью безотлагательного решения проблем, связанных с распространением новой коронавирусной инфекции.Законопроектом предусмотрены следующие корректировки процедур закупок:

предварительный отбор, который раньше был исключением из проверки закупочной комиссией соответствия участника закупки отдельным положениям закона, больше не является таким исключением;
Правила подачи заявок на участие в предварительном отборе участников закупки для оказания гуманитарной помощи или ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций природного или техногенного характера ^{^[2]}.

процедура предварительного отбора оказалась неэффективной для закупок в условиях ЧП, поэтому было принято решение отказаться от нее в данных обстоятельствах.

закупка у единственного поставщика также стала возможной для предотвращения (то есть при включении режима повышенной готовности) и / или ликвидации чрезвычайного положения, либо для доставки гуманитарной помощи;
в то же время заказчик может приобретать товары, работы или услуги в необходимых количествах и объеме, если использование конкурентных способов выбора поставщика требует много времени и неэффективно;
позволяет федеральным органам исполнительной власти заключать договоры с единственным поставщиком для выполнения специальных задач по обеспечению обороны и безопасности государства;
До 31 декабря 2020 года Правительству разрешено использовать основания для закупок у единственного поставщика, не предусмотренные каким-либо пунктом Закона №44-ФЗ.

Кроме того, «специальные» закупки в сфере строительства значительно упрощены в заключительных положениях Закона № 44-ФЗ:

исключено условие, что указанное правило распространяется только на закупки объектов капитального строительства в рамках национальных проектов;
право утверждения перечней объектов капитального строительства, приобретаемых «под ключ», предоставляется не только Правительству Российской Федерации и вышестоящим органам государственной исполнительной власти субъектов Российской Федерации, но и местным администрациям;
установлено, что такие списки должны быть утверждены до 1 января 2024 года;
установлено, что любое оборудование, необходимое для обеспечения работы объекта, может быть приобретено «под ключ», а не только медицинское оборудование, как раньше.

В соответствии с государственной политикой, направленной на изменение регулирования процедур государственных закупок в условиях пандемии, 25 марта 2020 года Минфин приступил к подготовке проекта Федерального закона «О внесении изменений в Федеральный закон« О пандемии ». договорная система в сфере закупок товаров, работ, услуг для государственных и муниципальных нужд »

(« Проект Минфина »), которая также направлена на оптимизацию процедуры закупок у единственного поставщика с целью ликвидация последствий форс-мажорных обстоятельств и ЧП ^{^[3]}.

Проект разработан в соответствии с п. 4.4. Плана первоочередных мер (действий), направленных на обеспечение устойчивого развития экономики в условиях обострения ситуации с распространением коронавирусной инфекции. Нормативный акт должен вступить в силу в июне.

Поправки, принятые в Закон № 44-ФЗ, направлены на поддержку бизнеса в условиях распространения COVID-19 как обстоятельства непреодолимой силы.Упрощенная процедура закупки позволит покупателям быстрее получать необходимые ресурсы, в том числе медикаменты, средства индивидуальной защиты, дезинфекцию и т. Д.

2. Более мягкие требования для МСП

При закупках у мелких предпринимателей и социально ориентированных некоммерческих организаций Федеральный закон № 98-ФЗ предусматривает, что до 31 декабря 2020 года покупатели не могут требовать от этих лиц обеспечения исполнения договоров и гарантийных обязательств (при условии, что авансовый платеж не производился).

Минфин планирует включить в Законопроект, среди прочего, поправки, позволяющие заказчику не предъявлять требования о предоставлении обеспечения по контракту при закупках у малых предприятий.

Кроме того, проект постановлений правительства , подготовленный Министерством финансов («Проект постановлений»), также содержит следующие положения:

Государственные компании включат в свои правила закупок правило, согласно которому они могут вносить аванс в размере до 50% от цены по контрактам, в соответствии с которыми 30% закупок совершаются у малых и средних предприятий.
госкомпаний должны принять решение об усилении контроля за соблюдением платежных обязательств по контрактам с МСП;
Государственные компании должны гарантировать, что соответствующие решения (в отношении авансовых платежей и более строгого контроля) распространяются на их дочерние и зависимые компании ^{^[4]}.

Указанные меры направлены на поддержку бизнеса, в том числе во избежание негативных последствий, связанных с распространением новой коронавирусной инфекции.

3. Более широкие возможности для изменения цены и срока контракта

В 2020 году Федеральным законом № 98-ФЗ допускается изменение срока действия договора и его цены, если их невозможно выполнить в условиях распространения COVID-19, а также в иных ситуациях, предусмотренных Правительством. ^{^[5]}.

Для этого необходимо иметь письменное обоснование для такого изменения и решение вышестоящего исполнительного органа, а поставщик должен обеспечить выполнение такого контракта с точки зрения новых обязательств, которые имеют ранее не было обеспечено.Одновременно:

предусмотрена возможность уменьшения суммы обеспечения;
по ранее предоставленной банковской гарантии возврат и инкассо не производятся;
для обеспечения договорных обязательств вложением денежных средств, установлены отдельные правила для увеличения или уменьшения цены договора и на период, который будет изменен;
государственный или муниципальный заказчик может произвести изменение в пределах бюджетных обязательств на время исполнения контракта.

Постановлением Правительства Российской Федерации от 19 марта 2020 г. № 672-р предусмотрено, что в соответствии с частью 1 статьи 111 Федерального закона 44-ФЗ в связи с принимаемыми мерами по предотвращению распространения COVID-19, когда конкретные контракты выполняются предприятиями автомобильной промышленности стороны могут договориться об изменении срока действия соответствующих контрактов, не требуя от поставщика уплаты пени за просрочку платежа в связи с просрочкой исполнения обязательств, при условии, что такая просрочка вызвано указанными мерами ^{^[6]}.Новые правила распространятся на 77 государственных и муниципальных контрактов, в том числе на поставку автобусов КамАЗ Московскому городскому агентству общественного транспорта и поставку автомобилей Lada для Министерства внутренних дел ^{^[7]}

Также в проекте Директив Минфин предусмотрел возможность продления в 2020 году сроков выполнения договоренностей и корректировки цен при условии, что это стало необходимым в связи с распространением COVID-19. Уточняется, что госкомпаниям придется проводить заседания своих советов директоров для обсуждения этого вопроса в течение 10 дней с момента получения директив.

Ослабление в виде разрешения сторонам контракта изменять цену и срок представляется оправданным, потому что в этих экстремальных условиях нам нужно избегать массового несоблюдения условий контрактов, ответственности поставщиков и отсутствие товаров, работ и услуг, необходимых покупателям.

4. Изменение порядка применения штрафных санкций

Федеральный закон от 29.07.2012 г.98-ФЗ добавляет к порядку начисления процентов за просрочку платежа возможность начисления таких процентов не только на основании цены контракта, но и на основе цены отдельного этапа контракта за вычетом обязательств, исполненных на этом этапе. Кроме того, закон распространил процедуру списания штрафных санкций за 2015 и 2016 годы на штрафы, начисленные в 2020 году.

Кроме того, в отношении изменений, касающихся ответственности за неисполнение контракта, Письмо №24-06-05 / 26578, 219-AG-70, МЕ / 28039/20 Минфина, МЧС и Федеральной антимонопольной службы от 3 апреля 2020 г. «О позиции Минфина, МЧС и Федеральной антимонопольной службы». Антимонопольная служба по закупкам товаров, работ и услуг для государственных и муниципальных нужд в связи с распространением новой коронавирусной инфекции, вызванной 2019-nCoV »предусматривает, что в случае неисполнения договора в связи с распространением COVID-19 поставщик может называть это обстоятельство основанием для освобождения от штрафа (штрафа или пени за просрочку платежа) , требуемого заказчиком.

Проект Директив предусматривает, что штрафные санкции не применяются к поставщикам, когда последние нарушают свои обязательства по контрактам. По аналогии с вышеупомянутой поправкой, касающейся возможности изменения срока и цены контракта, госкомпании также должны будут провести в течение 10 дней заседания советов директоров по этому вопросу (при этом представители государства должны будут голосовать в пользу на этих встречах).

5.Особенности покупок во время эпидемии COVID-19

Наконец, 6 апреля 2020 года Правительство РФ утвердило Постановление № 443 от 3 апреля 2020 года № «Об особенностях совершения закупок в период, когда принимаются меры по обеспечению санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации. в связи с распространением новой коронавирусной инфекции ».239 от 2 апреля 2020 года в соответствии со статьей 111 Закона № 44-ФЗ, в отношении срока, указанного в пункте 1 Указа с 4 по 30 апреля 2020 года включительно, установлены следующие особенности в отношении закупок. производятся в период принятия мер по обеспечению санитарно-эпидемиологического благополучия населения Российской Федерации в связи с распространением COVID-19:

сроки, предусмотренные Законом №44-ФЗ и правила включают только рабочие дни, кроме субботы и воскресенья;
последний день срока, исчисляемого в соответствии с Законом № 44-ФЗ, который приходится на нерабочий день, указанный в пункте 1 Указа, должен быть перенесен только в том случае, если он выпадает на субботу или воскресенье. При этом дата проведения электронных аукционов в соответствии с п. 1 п. 8 ст. 33 Закона № 44-ФЗ (с проектной документацией) не переносится;
членов комиссии могут рассматривать заявки в дистанционном режиме;
предоставлено право не составлять протоколы определения поставщиков на бумажном носителе.Достаточно подготовить протокол в электронном виде и подписать его квалифицированной цифровой подписью представителя заказчика;
при отправке проекта договора поставщику на подписание заказчику разрешается продлить срок исполнения обязательств по договору на срок не более срока, указанного в п.1 Постановления, т.е. не более 27 календарных дней.

О ЧЕМ ДУМАТЬ И ЧТО ДЕЛАТЬ

Последующие меры, принимаемые правительством, и меняющиеся правила, чтобы оставаться добросовестными участниками рынка
Избегайте нарушений антимонопольного законодательства, учитывайте самые последние изменения в регулировании при участии в процедурах закупок, в том числе при закупках у одного поставщика
Оценить коммерческие решения компании, связанные с изменением контрактных цен и сроков исполнения, с точки зрения их экономической обоснованности и соответствия законодательству
Обращайте особое внимание на то, как вы строите коммерческие отношения с МСП при совершении покупок
Рассмотреть возможность принятия иных мер, направленных на снижение рисков нарушения антимонопольного законодательства

ПОМОЩЬ СОВЕТНИКА

Юристы «Пепеляев Групп» имеют значительный опыт юридической поддержки клиентов в сфере антимонопольного регулирования, включая организацию и проведение государственных и муниципальных закупок для российских и иностранных компаний.Наши юристы с радостью окажут любую необходимую юридическую поддержку, в том числе по:

Анализ потенциальных рисков, связанных с участием компании в процессе закупок
разработка стратегии эффективного участия компаний в закупках с проверкой принимаемых мер на соответствие Закону № 44-ФЗ
оценка законности коммерческих решений, принимаемых в связи с участием в закупках, а также проверка соответствующих документов с целью предотвращения нарушений антимонопольного законодательства
представление интересов клиентов в Федеральной антимонопольной службе и в судах по делам об оспаривании результатов государственных закупок, исключении лиц из реестра недобросовестных поставщиков и других правонарушениях.
разрабатывает иные меры, направленные на снижение рисков нарушения антимонопольного законодательства.

[1] Утратил силу в связи с отменой с 1 апреля 2020 года статьи 80 Федерального закона от 5 апреля 2013 года № 44-ФЗ, в соответствии с которым было принято Постановление Правительства Российской Федерации № 1765-р. 30 сентября 2013 года. Предварительный отбор участников для закупки по Перечню, утвержденному данным документом, не проводится.

[5] 10 апреля стало известно, что Минфин готовит проект постановления правительства, предусматривающего «иные случаи» изменения цены договоров госзакупок // URL: https: //prozakupki.interfax. ru / article / 1714

31 Кодекс США § 3324 — Авансы | Кодекс США | Закон США

Исторические и редакционные заметки
3324 (а)	31: 529 (2-е предложение).	Р.С. §3648; 2 августа 1946 г., гл. 744, §11, 60 Stat. 809.
3324 (б)	31: 529 (1-е, 3-е, последние предложения).
3324 (в)	31:44 (1-е предложение).	10 июня 1921 г., гл. 18, §304 (1 абз. 1 предложение), 42 Stat. 24.
	31:76 (1-е, последнее предложение).	31 июля 1894 г., гл.174, §11 (1-е, 4-е предложения), 28 Stat. 209.
3324 (г)	31: 530a.	12 июня 1930 г., гл. 470, §1, 46 Стат. 580; 20 июля 1961 г., Pub. L. 87–91, §1, 75 Stat. 211.
	31: 530b.	12 июня 1930 г., гл. 470, 46 Стат. 580, §2; добавлен 22 декабря 1974 г., Pub. Л. 93–534, 88 стат. 1731.
	31: 686–2.	, 15 апреля 1926 г., гл. 146, §101 (оговорка на стр. 267), 44 Stat. 267.

В подразделе (а) для ясности добавлены слова «За исключением случаев, предусмотренных в этом разделе». Слова «уже предоставлено» и «уже доставлено» заменяются на «предоставлено». . . доставлено ранее к такому платежу »для ясности и последовательности.

В подразделе (b) перед пунктом (1) слова «в любом случае» и «Это, однако, должно быть законным по особым требованиям» опускаются как излишки.В пункте (2) (A) (i) слово «официальный» заменено на «офицер» для единообразия в измененном названии. Слова «правительства» опущены как профицит. Пункт (2) (A) (ii) заменен на «публичные обязательства» для ясности. В пункте (2) (B) слово «физическое лицо» заменено словом «лица» для согласованности. Слова «вооруженные силы» заменены словом «военная и военно-морская служба» для соответствия заголовку 10. Слова «и надлежащие» опущены за ненадобностью. Слова «регулярно выплачивать заработную плату и надбавки» заменяются словами «выплата заработной платы и вознаграждений, на которые они могут иметь право, не могут производиться регулярно», чтобы исключить ненужные слова, для ясности и согласованности с заголовком 37.

В подразделе (c) слова «Генеральный контролер» заменены на «Главное бухгалтерское управление» для единообразия.

В подразделе (d) перед пунктом (1) слова «15 апреля 1926 г. и после» в 31: 686–2 опущены как исполненные. Слово «агентство» заменено на «отдел или учреждение» из-за раздела 101 пересмотренного названия и для единообразия. Слова «могут вносить аванс из ассигнований, имеющихся для этой цели» заменяются словами «могут переводить авансом».. . такие суммы, которые могут потребоваться для покрытия расходов »для ясности и последовательности. В пункте (1) слова «Армейский секретарь» заменены на «Армейский корпус связи» из-за 10: 3012. Название военного министра было изменено на военный секретарь, а военное министерство было обозначено как министерство армии в соответствии с разделом 205 (а) Закона от 26 июля 1947 г. (гл. 343, 61 Стат. 501). , а также статьями 1 и 53 Закона от 10 августа 1956 г. (ch. 1041, 70A Stat. 157, 676).Пункт (2) заменен на 31: 530a и 530b, чтобы исключить ненужные слова. Слова «или муниципальное правительство округа Колумбия» опущены из-за статей 441–445 и 736 Закона от 24 декабря 1973 г. (Pub. L. 93–198, 87 Stat. 798, 823).

Срок оплаты по договору — 44 ФЗ. Ужесточены условия оплаты контрактов со стороны заказчиков. Ограничения по срокам предоплаты

В этой статье мы поговорим о том, какие существуют способы оплаты по госконтрактам.Рассмотрим, когда и в каком размере заказчик может заплатить аванс, когда предусмотрена поэтапная оплата и в какие сроки необходимо перевести деньги поставщику.

Аванс по госзаказу

Если вы хотите сделать покупку более привлекательной, покупатель может установить оплату заранее. В этом случае необходимо включить в договор авансовый пункт, записать его размер, а также срок зачисления денежных средств. Если заказчик пренебрегает этим, он нарушит Закон 44-ФЗ.

Внимание! Если при покупке предусмотрены условия предоплаты, залог ставки увеличивается до ее размера.

Когда авансовые платежи запрещены

Есть перечень, утвержденный Постановлением Правительства № 21-р от 16.01.2018 … Он включает товары и услуги, которые покупатель не может приобрести на условиях предоплаты. В список входят самые разные предметы — бумага, портативные компьютеры, автомобили, услуги по ремонту компьютеров и так далее. В списке 26 позиций.

Регистрация в ЕРУЗ ЕИС
С 1 января 2019 года для участия в торгах по 44-ФЗ, 223-ФЗ и 615-ПП необходима регистрация в реестре УРУЗ (Единый реестр участников закупок) на портал ЕИС (Единая информационная система) в сфере закупок zakupki.gov.ru.
Оказываем услугу по регистрации в ЕСУЗ в ЕИС :

Сумма аванса

Аванс устанавливается в следующем размере:

До 30% от контрактной цены … Это размер по умолчанию, то есть когда иное не предусмотрено законом. В таком же размере аванс может быть установлен при закупках на ремонтно-строительные работы, если цена контракта не превышает 600 миллионов рублей.
30 до 80% … Такой рост возможен при закупках на исследования и разработки, направленные на импортозамещение. В этом случае размер аванса ограничивается сверху размером увеличенного лимита. Аванс переводится на казначейский счет.
До 100% … При покупке некоторых объектов допускается полная предоплата. Это, например, услуги связи, профессиональная переподготовка и повышение квалификации, экспертиза проектной документации, покупка печатных изданий и некоторые другие объекты.

Примечание! Формулировка «до 100%» позволяет заказчику самому определять размер предоплаты.

Поиск покупок с предоплатой

Закон 44-ФЗ не требует от покупателя заполнять поле предоплаты при заполнении уведомления.А это существенно усложняет поиск покупок, в которых он предусмотрен.

Однако можно использовать следующие механизмы:

добавить «авансовый платеж» к ключевому слову в строке поиска;
использовать фильтр по NMCK и метод выбора.

Оплата при доставке

Контракт считается выполненным, если поставщик поставил все товары или услуги, заказчик их принял и оплатил.

Порядок приема и оплаты обязательно прописывается в договоре.Он также устанавливает, , документы которого должны быть подписаны сторонами как «закрывающий» контракт. Это может быть, например, акт приемки, накладная и другие.

Оплата должна быть произведена в следующие сроки:

в целом — не позднее 30 дней ;
, если подрядчиком по контракту стали СМП или СОНО — не позднее 15 дней .

Обратный отсчет ведется с даты подписания акта приема-передачи.

Важно понимать, что исключение условий оплаты из договора незаконно — для должностного лица заказчика это чревато штрафом в размере 3000 рублей. Также в договоре нельзя установить более длительный срок оплаты.

Хотя в судебной практике есть примеры, когда арбитры считали правомерным включить такое условие в договор: заказчик не несет ответственности за просрочку платежа, если это связано с тем, что деньги не были получены.

Поэтапная оплата

Некоторые контракты предусматривают поэтапную оплату и оплату. Это условие должно быть прописано в контракте. Кроме того, необходимо указать в соглашении информацию о сроках исполнения каждого этапа и дату, когда договор должен быть полностью исполнен.

Оплата отдельных этапов производится так же, как и за весь договор. Это означает, что каждый раз нужно подписывать акты приема-передачи , а при необходимости — проводить экспертизу.

Иногда. Важно помнить, что продление договора запрещено.

Поэтапное исполнение контракта также удобно для поставщиков, так как после выполнения каждого этапа можно уменьшить сумму обеспечения по контракту … Если оно было внесено наличными, то это происходит в одном из следующими способами:

Поставщик передает клиенту, а он возвращает уплаченную ранее сумму.
Клиент платит поставщику разницу между первоначальным и уменьшенным залогом.

Если обеспечение контракта было предоставлено банковской гарантией , то поставщик может предоставить новую гарантию уменьшенной суммы. В этом случае банк должен вернуть деньги поставщику в размере разницы между старой и новой комиссией за выдачу гарантии. Но нужно учитывать, что банк может на это не согласиться.

Условия оплаты договора по 44-ФЗ являются обязательным условием покупки. С 2017 года они претерпели изменения.В статье мы расскажем, какие условия оплаты по 44-ФЗ о закупках установлены в последней редакции и каковы риски их нарушения.

Платеж по договору 44-ФЗ

ч. 13 ст. 34 Закона № 44-ФЗ гласит, что договор должен содержать обязательные условия о порядке и сроках:

приемка;
оформление результатов приемки;
.

Изменение срока платежа указано в ст.95 Закона № 44-ФЗ, поскольку это одно из существенных условий договора между заказчиком и поставщиком.

Максимальный срок платежа по договору 44-ФЗ

С 1 мая 2017 года введены новые сроки оплаты контракта по 44-ФЗ. Правила изменились после вступления в силу Федерального закона от 01.05.2017 № 83-ФЗ. После подписания акта приема-передачи заказчику дается максимум 30 дней на оплату контракта. Если поставщиком, подрядчиком или подрядчиком является SMP или SONKO, этот период сокращается до 15 дней.Правило установлено в ст. тридцать.

Часто возникает вопрос: как рассчитываются сроки оплаты контракта по 44-ФЗ — в календарных или рабочих днях? Это зависит от типа провайдера. Обычно 30-дневный период исчисляется календарными днями. Если поставщик — SMP или SONKO, 15-дневный период должен быть засчитан в рабочих днях.

Штрафы по 44-ФЗ за нарушение сроков оплаты по договору

Что делать, если заказчик нарушает условия оплаты договора по 44-ФЗ? Ответственность ждет чиновника.Впервые ему грозит штраф от 30 до 50 тысяч рублей. При повторном нарушении — отстранение от работы на срок от 1 до 2 лет. Санкция прописана в ст. 7.32.5 КоАП РФ.

Что учитывать при оплате по договору 44-ФЗ? Рекомендуем не указывать дату расчетов в контракте. Это зависит от работы банка. Даже если платеж был отправлен вовремя, из-за технической ошибки, неточностей в реквизитах, деньги могут поступить позже.Также советуем не откладывать оплату до последнего дня.

Вопросы по оплате договора 44-ФЗ

Популярный вопрос по оплате контракта по 44-ФЗ: нужно ли менять сумму в связи с повышением НДС в 2019 году? Нет. Более того, за увеличение цены контракта можно получить штраф в размере 20 тысяч рублей. (часть 4 статьи 7.32 КоАП РФ). Если уведомление размещено до 1 января 2019 года, в контракте указана ставка 18%.

Может ли заказчик платить поэтапно, если они не предусмотрены договором? Нет. Техническое задание и проект контракта должны предусматривать такой способ оплаты, чтобы заказчик мог вносить деньги в рассрочку. То же условие действует и наоборот: если определена пошаговая процедура оплаты, то она должна оплачиваться по результатам акцепта каждого этапа.

Можно ли в договоре прописать оплату, поскольку деньги поступают из бюджета?

Нет, укажите в договоре конкретную дату, когда вы будете платить.Штраф за нарушение сроков и порядка оплаты должностного лица составляет от 30 000 до 50 000 рублей. Наказание содержится в части 1 статьи 7.32.5. КоАП.
Необходимо оплатить в сроки, предусмотренные договором. Максимальный срок составляет 30 календарных дней, а для закупок между СМП и СОНО — 15 рабочих дней с даты подписания акта приема-передачи (ч. 13.1 ст. 34 Закона № 44-ФЗ).
Контролеры накажут, даже если оплата задерживается не по своей вине.Это подтвердил Верховный суд. Итак, заказчик прописал в договоре, что оплатит покупку после получения финансирования. Подрядчик выполнил условия договора, но заказчик не перечислил деньги в течение 30 дней. Контрагент требовал деньги через суд.

Арбитражная практика

В качестве примера приведем решение Арбитражного суда Приморского края от 12.09.2018 по делу № А51-7937 / 2018.Стороны подписали договор на поставку офисной бумаги. Цена контракта — 220 757 рублей. Поставщик привез товаров на общую сумму 127 769 рублей. Это подтверждается двумя счетами-фактурами. Однако оплата так и не была получена. Когда размер штрафа достиг 13,4 тыс. Руб., Поставщик добавил к нему штраф в размере 5 518,93 руб. и отправил претензию заказчику. Не получив ответа, он обратился в суд.

Суд посчитал неправильным расчет пени.Он установил, что компания учитывает просрочку платежа по договору с 01.07.2017, а исходя из ее условий, штраф должен рассчитываться с 30.04.2016 (когда истек 30-дневный срок платежа) на одна накладная, а от 23.07.2016 — другая … В итоге вместо заявленной суммы поставщик мог попросить 20 936,13 руб. Однако суд не вправе выходить за рамки заявленных требований, поэтому с заказчика было взыскано всего 17 493,19 рубля.

Что касается штрафа в размере 5 518,93 рубля, то он был рассчитан правильно по ставке 2,5% согласно Постановлению Правительства РФ от 25 ноября 2013 г. № 1063. Здесь суд согласился с поставщиком. . Разберемся, за что наложен штраф. Поставка по договору согласно его условиям происходит на основании предварительного заказа заказчика. Учреждение направило поставщику две такие заявки на общую сумму 127 625 штук.27 руб. Это около 50% от изначально согласованного объема. В этом случае заказчик вправе изменить изначально заявленное количество продукции не более чем на 10%.

Расчет возможного количества мелких покупок и их отражение в графике При расчете лимитов мелких покупок необходимо учитывать все контракты, заключенные до наступления следующего финансового периода, но оплаченные после его начала. Если у компании достаточно высокий оборот, то лимиты для них лучше рассчитывать исходя из 5% от СГОЗа.Для остальной части организации наиболее предпочтительной считается фиксированная сумма в 2 миллиона рублей. Вот иллюстративный метод расчета такого лимита. На закупку организации выделено 100 миллионов рублей. Определить 5% СГОЗа. Эта сумма будет равна 5 миллионам рублей. При этом соблюдается правило, что 5% ГГОЗа не должны превышать отметку в 50 млн руб. Поэтому выгоднее принять за предел 5 миллионов.

Порядок и условия оплаты по договорам ФЗ 44

В этих случаях договор может быть заключен в любой форме, предусмотренной Гражданским кодексом РФ для сделок.Обратите внимание на фразу «требования частей 4-9, 11-13 !!! Дело в том, что необходимо указать, что цена твердая и определяется на весь срок действия контракта — исключений нет — это в любом случае нужно указать и в статье 95 нет фразы, что до 100 тысяч можно можно менять как угодно (((так опять печально, если заключены договоры на сумму до 100 тысяч и есть необходимость изменить их цену, то нужно ли придерживаться правил ее изменения по статье 95? — Да, это необходимо хотя бы потому, что статья 95 44-ФЗ не содержит изъятий; 2) о коммунальных квартирах — мне лично как таковой не хватает.

Мелкие закупки (до 100 и 400 тысяч)

Покупатель может самостоятельно выбрать этот порог из двух предложенных вариантов, исходя из годового объема покупок. Для небольших организаций оказывается выгодным применить порог в 2 млн руб.
Таким образом, заказчик может приобрести любые товары и услуги по цене одного контракта не более 100 тысяч рублей до исчерпания описанных выше лимитов. Как правило, таким способом организации предпочитают приобретать электроэнергию, тепло, услуги по техническому обслуживанию транспорта, экспертной оценке и тому подобное.
Это позволяет провести необходимые работы в кратчайшие сроки. Описанные лимиты не распространяются на сельскохозяйственные предприятия. Для организаций исполнительной власти пороги определяются индивидуально. Такие правила регулируются положениями статьи 93 44-ФЗ.

Покупки до 100 тысяч рублей по 44-фз: особенности

Кроме того, сделка может быть заключена в любой форме, предусмотренной гражданским законодательством для сделки.Нужно ли вводить «директ» в реестр договоров и в отчет об исполнении договоров? В отличие от всех заключаемых договоров данный вид договоров не отражается в единой информационной системе, и это право закреплено в части 1 статьи 103 и части 3 статьи 94 Закона.

Есть исключение. Указанные ограничения по финансовым ресурсам не распространяются на закупки, производимые подведомственными им администрациями и учреждениями в сельских поселениях для удовлетворения потребностей таких сельских поселений, соответственно.Какая ответственность? В соответствии с частью 1 статьи 7.29 КоАП РФ ошибочный выбор способа закупки влечет наложение административного штрафа в размере 30 тысяч рублей на должностное лицо заказчика.

Какой срок оплаты по договору до 100 000 рублей?

Внимание

Правительство Российской Федерации (часть 5 статьи 34 Закона № 44-ФЗ). Заказчик вправе не включать это условие в договор в случаях, предусмотренных частью 15 статьи 34 Закона N 44-ФЗ.

В каких случаях заказчик не может указать срок платежа в договоре? В силу части 15 статьи 34 Закона № 44-ФЗ заказчик вправе не применять требования частей 4-9, 11-13 настоящей статьи при заключении договора с единым поставщиком в следующих случаях: :

приобретение товаров, работ или услуг, относящихся к сфере деятельности субъектов естественных монополий в соответствии с Законом № 147-ФЗ «О естественных монополиях», или услуг центрального депозитария;
закупка осуществляется государственной или муниципальной организацией образования, государственным или муниципальным учреждением из числа указанных в пункте 5 части 1 статьи 93 Закона №44-ФЗ на сумму не более 400 тыс. Руб.

Сроки оплаты договоров покупателями ужесточены

Авторы закона о государственных и муниципальных закупках предусмотрели возможность покупателя приобретать любой товар у любого понравившегося контрагента. Но вместе с тем законодатели наложили некоторые особенности и ограничения на проведение таких покупок.

Среди государственных и муниципальных заказчиков этот вид контракта чаще всего называют «прямым»… Сколько денег потратить на «прямые контракты»? В соответствии с требованиями п. 4 п. 1 части 93 статьи 44 Федерального закона заказчик вправе совершать закупки на сумму не более 100 тыс. Руб. По каждому контракту. При этом общая сумма заключаемых за год контрактов не должна превышать 2 млн.

руб., Или не более 5% от общего годового объема закупок, но не более 50 млн. Руб. При заключении таких договоров покупатель вправе выбрать любой предмет покупки.

Условия оплаты договора по 44-ФЗ являются обязательным условием покупки. С 2017 года они претерпели изменения. В статье мы расскажем, какие условия оплаты по 44-ФЗ о закупках установлены в последней редакции и каковы риски их нарушения.

Платеж по договору 44-ФЗ

ч. 13 ст. 34 Закона № 44-ФЗ гласит, что договор должен содержать обязательные условия о порядке и сроках:

приемка;
оформление результатов приемки;
.

Изменение срока платежа указано в ст. 95 Закона № 44-ФЗ, поскольку это одно из существенных условий договора между заказчиком и поставщиком.

Максимальный срок платежа по договору 44-ФЗ

С 1 мая 2017 года введены новые сроки оплаты контракта по 44-ФЗ. Правила изменились после вступления в силу Федерального закона от 01.05.2017 № 83-ФЗ. После подписания акта приема-передачи заказчику дается максимум 30 дней на оплату контракта.Если поставщиком, подрядчиком или подрядчиком является SMP или SONKO, этот период сокращается до 15 дней. Правило установлено в ст. тридцать.

Штрафы по 44-ФЗ за нарушение сроков оплаты по договору

Вопросы по оплате договора 44-ФЗ

Можно ли в договоре прописать оплату, поскольку деньги поступают из бюджета?

Арбитражная практика

Действующим законодательством предусмотрена возможность внесения заказчиком предоплаты за исполнение государственного контракта. Это поможет поставщику выполнить взятые на себя обязательства в срок и в полном объеме. До недавнего времени размер аванса не регулировался. Но Правительство РФ внесло соответствующие поправки в законодательство.Теперь перевод авансовых платежей должен соответствовать определенным требованиям. Когда можно внести предоплату, а когда это запрещено. Обычно указывается сумма денег, которую заказчик передает поставщику во исполнение своих договорных обязательств заранее. Каждое бюджетное учреждение вправе самостоятельно определять условия договоров, заключаемых с поставщиками. Следовательно, они могут установить возможность предоставления аванса по своему усмотрению.

Ограничения по срокам предоплаты

Закон № 44-ФЗ регулирует отношения, направленные на обеспечение государственных и муниципальных нужд, в части планирования закупок товаров, работ, услуг, определения поставщиков (подрядчиков, исполнителей), заключения гражданско-правового договора (контракта), являющегося предметом то есть поставка товаров, выполнение работ, оказание услуг, особенности исполнения договоров, мониторинг закупок, а также аудит и контроль в сфере закупок.В соответствии с ч. 1, 2 ст. 1 УПК РФ, порядок возбуждения уголовного дела на территории РФ устанавливается УПК РФ.
Обязателен для судов, прокуратуры, органов предварительного следствия и дознания, других участников уголовного процесса.

Они хотят 3 контракта до 100 т.р. и чтобы контракты предусматривали предоплату 30%, точнее: 2.2.1. Оплата услуг Исполнителя осуществляется путем перечисления Заказчиком в течение 10 (десяти) банковских дней с даты подписания настоящего Договора на расчетный счет Исполнителя, реквизиты которого указаны в разделе 14 Договора на внесение предоплаты в размер 30% от цены договора, что составляет 30 000 рублей 00 копеек, НДС не облагается. 2.2.2. Окончательный расчет по настоящему Контракту производится Заказчиком путем перечисления на банковский счет Исполнителя, реквизиты которого указаны в разделе 14 Контракта, суммы 70 000.00 рублей 00 копеек, НДС не облагается, на основании надлежащим образом оформленного и подписанного обеими Сторонами Акта сдачи-приемки оказанных услуг, в течение 20 (двадцати) банковских дней с даты выставления Исполнителем счета на оплату Цены Контракта.

Предоплата по 44 кв. Уточнение фас

Поставщики (подрядчики, исполнители) определяются закрытым способом в случаях, указанных в пункте 2, с целью ограничения круга участников закупки, а не для того, чтобы не размещать информацию о закрытых методах закупки в единой информационной системе закупки.Выполнение и оплата отдельных этапов договора: необходимо ли заказчику вносить информацию о них в реестр договоров? Минфин рассмотрел данный вопрос в Письме от 28 мая 2014 г. № 02-02-07 / 25618 и пояснил, что при наличии у заказчика документов, подтверждающих выполнение этапа контракта, то есть документов, подтверждающих наступление денежное обязательство в случае частичной поставки товара, частичного выполнения работ, оказания услуг или документов, подтверждающих оплату на этапе контракта, заказчик представляет в Федеральное казначейство информацию об исполнении каждого факта оплаты за этап заключения договора в установленном порядке.

Аванс за разъяснение 44 фз фас

Закон № 44-ФЗ предусматривает, в частности:

приемка поставленных товаров, выполненных работ (их результатов), оказанных услуг, а также отдельных этапов доставки товаров, выполнения работ, оказания услуг, предусмотренных договором;
оплата заказчиком поставленных товаров, выполненных работ (их результатов), оказанных услуг, а также отдельные этапы исполнения договора.

В этом случае договором может быть предусмотрено поэтапное исполнение и оплата договора (п. 2 ч. 3 ст. 21 Закона № 44-ФЗ) Покупка за наличный расчет: каковы особенности приложения норм Закона № 44-ФЗ и разрешение на их оплату? Часть 2 совместного Письма Минэкономразвития РФ № 18505-ЕЕ / D28i, Минфина РФ № 02-02-04 / 39043 от 05.08.2014 содержит следующие пояснения.В соответствии с положениями п. 15 ст. 34 Закона № 44-ФЗ при заключении договора в случаях, предусмотренных п.

4, 5 ч. 1 ст.
Закона № 44-ФЗ договор может быть заключен в любой форме, предусмотренной Гражданским кодексом Российской Федерации для совершения сделок. Данные закупки не включаются в реестр договоров и в отчет об исполнении договора (п.
1 ст. 103, ч. 9 ст. 94

Закон №44-ФЗ). Оплата покупателями обязательств по указанной закупке товаров, работ и услуг может производиться в денежной форме, в том числе путем выдачи работникам подотчетных сумм за приобретение товаров, работ и услуг с учетом максимальной суммы денежных расчетов в Российская Федерация между юридическими лицами по одной сделке. Клиенты, лицевые счета которых открыты в территориальных органах Федерального казначейства, осуществляют операции по оплате таких покупок в соответствии с Правилами предоставления денежных средств организациям, лицевые счета которых открыты в территориальных органах Федерального казначейства, утвержденными Правительством Российской Федерации. Приказ Минфина РФ от 31 декабря 2010 г.199н.

Меню ГлавнаяНовости- Закупки в СМИ- События- Новости EIS- Вестник Института госзакупок- Бюллетень аукционов- Авторские статьи- Юмор в госзаказе 44-ФЗ- Положение- Письма и пояснения- Инструкции и документация- Шаблоны документов- Судебные практика- Решения контролирующих органов223 -ФЗ- Письма и разъяснения- Нормативно-правовые акты Видео- Вебинары- СеминарыВопросы для клиентов- Консультации по участнику 44-ФЗУ- Электронная подпись- Банковская гарантия- Консультации по сертификату 44-ФЗ- СРО, Лицензионные ссылки — Учебные центры — Услуги и справочники — Специализированные организации — Торговые площадки — Общественные организации У нас есть много планов и проектов для вас, но ресурсы ограничены.

Следовательно, приложение к отчету о платежных поручениях клиента для оплаты контракта не требуется. Причем согласно пп. «С» и «d» пункта 27 Правил № 1093 в разделах III и IV формы отчета:

графа «Документ, подтверждающий выполнение» для показателей 1 и 2 не заполняется, для показателей 3 и 4 в данной графе указывается наименование и реквизиты документа, подтверждающего исполнение обязательства по оплате или поставке (исполнению, предоставлению) товаров , работы, услуги;
в графе «Документ, подтверждающий начисление или уплату неустойки» по соответствующим показателям пишутся наименования и реквизиты документов, подтверждающих начисление или уплату неустойки.

Приказом Минфина РФ от 19 сентября 2008 г. № 98н.
Законом № 44-ФЗ предусмотрено, что к отчету должно прилагаться заключение по результатам экспертизы отдельного этапа исполнения договора, поставленных товаров, выполненных работ или оказанных услуг, а также документ. о принятии таких результатов или иного документа, предусмотренного законодательством Российской Федерации. Требование приобщения к отчету иных документов не установлено Законом от 25.07.2012 г.44-ФЗ.

Информация

Данные нормы указаны в Положении о подготовке и размещении в единой информационной системе в сфере закупок отчета об исполнении государственного (муниципального) контракта и (или) о результатах отдельного этапа его исполнения. , утверждена Постановлением Правительства Российской Федерации от 28 ноября 2013 г. № 1093 (далее — Положение № 1093). Данное постановление также не содержит положений, предусматривающих приложение иных документов к отчету помимо документов, указанных в п.

10 ст. 94 Закона № 44-ФЗ.

Внимание

Приказ № 98н о бюджетных обязательствах получателей средств федерального бюджета, размер которых не превышает лимита, установленного Центральным банком Российской Федерации для расчетов наличными деньгами в Российской Федерации между юридическими лицами и оплата которых осуществляется наличными деньгами, подлежат регистрации в органах Федерального казначейства на основании заявлений о получении денежных средств, без представления получателями средств федерального бюджета в органы Федерального казначейства информации о принятом бюджетном обязательстве (ф.0531702). Разрешение на оплату указанных обязательств получателями средств федерального бюджета осуществляется в соответствии с Порядком № 87н, без представления в органы Федерального казначейства документов, подтверждающих возникновение денежных обязательств (счет-фактура, акт приемки-сдачи, акт выполненных работ (оказанных услуг). ), накладная, накладная).

Возмещение командировочных расходов сотрудникам и служащим: это покупка в соответствии с положениями Закона № 44-ФЗ? Возмещение командировочных расходов сотрудникам наличными не является покупкой и, соответственно, не подлежит включению в план закупок и график закупок, в реестр договоров.Если заказчик считает необходимым заключить договор на оказание услуг по отправке работника в командировку, например, для обеспечения проезда к месту командировки и обратно, аренды жилого помещения, транспортных услуг, то указанный договор должен быть заключен в соответствии с п.

26 ч. 1 ст. 93 Закона № 44-ФЗ и информация об осуществлении данной закупки указывается в плане, графике закупок, а также в реестре договоров.
Состав документов и сведений, включенных в реестр договоров, заключаемых заказчиками, указан в ст. 103 Закона № 44-ФЗ. В частности, согласно части 7 этой статьи, информация о закупках товаров, работ, услуг, о заключении договоров, составляющих государственную тайну, включается в отдельный реестр договоров. Данная информация не подлежит опубликованию в СМИ и размещению в сети Интернет, а также не размещается в единой информационной системе (ч. 4 ст. 4 Закона №44-ФЗ). Закрытые методы определения поставщиков (подрядчиков, исполнителей) используются в случаях (ст.

84 Закона № 44-ФЗ): 1) закупка товаров, работ, услуг, сведения о которых составляют государственную тайну, при условии, что такая информация содержится в закупочной документации или в проекте контракта; 2) в иных случаях, предусмотренных пунктами 1, 3, 4 ч. 2, ст.

44 фз статья 37 п 3. Заказчик имеет право на это только в случаях, когда

1.Если в ходе конкурса или аукциона начальная (максимальная) цена контракта превышает пятнадцать миллионов рублей и участник торгов, с которым заключен контракт, предлагается цена контракта, которая на двадцать пять процентов и более ниже. чем начальная (максимальная) цена контракта, либо предлагается сумма цен единиц товаров, работ, услуг, которая на двадцать пять процентов и более ниже первоначальной суммы цен указанных единиц, контракт заключается только после предоставления такому участнику обеспечения исполнения контракта в размере, превышающем полуторакратный размер обеспечения исполнения контракта, указанного в документации о проведении конкурса или аукциона, но не менее чем сумма предоплаты (если договором предусмотрена предоплата).

2. Если в ходе конкурса или аукциона начальная (максимальная) цена контракта составляет пятнадцать миллионов рублей или меньше и участник торгов, с которым заключен контракт, предлагается цена контракта, которая составляет двадцать пять процентов или ниже начальной (максимальной) цены контракта, либо предлагается сумма удельных цен товаров, работ, услуг, которая на двадцать пять процентов и более ниже начальной суммы цен указанных единиц, договор является заключаются только после того, как такой участник обеспечит исполнение договора в размере, указанном в части 1 настоящей статьи, или сведения, подтверждающие добросовестность такого участника в соответствии с частью 3 настоящей статьи, с одновременным предоставлением таким участником исполнения контракта в размере исполнения контракта, указанном в закупочной документации.

(см. Текст в предыдущей редакции)

3. Информация, подтверждающая добросовестность участника закупки, включает информацию, содержащуюся в реестре договоров, заключенных заказчиками, и подтверждающую, что такой участник выполнил его в течение трех лет до даты подачи заявки. на участие в закупке трех контрактов (при условии правопреемства), заключенных без применения к такой стороне штрафных санкций (пени, пени). При этом цена одного из таких контрактов должна составлять не менее двадцати процентов от начальной (максимальной) цены контракта, указанной в извещении о закупке и документации о закупке.

(см. Текст в предыдущем издании)

4. В случае открытого конкурса, конкурса с ограниченным участием, двухэтапного конкурса, закрытого конкурса, закрытого конкурса с ограниченным участием, закрытого двухэтапного конкурса Конкурс, информация, предусмотренная пунктом 3 настоящей статьи, предоставляется участником закупки в составе заявки на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двухэтапном конкурсе, закрытом конкурсе, закрытом конкурсе с ограниченным участием. , закрытый двухэтапный конкурс.Закупочная комиссия отклоняет такую заявку, если указанные сведения недействительны. Решение об отклонении такой заявки фиксируется в протоколе определения поставщика (подрядчика, подрядчика) с указанием причин отклонения такой заявки и доводится до участника закупки, направившего заявку, не позднее рабочего дня, следующего за день подписания протокола. Если участник закупки в случае, предусмотренном пунктом 2 настоящей статьи, не предоставит информацию, подтверждающую его добросовестность, в соответствии с формой заявки на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двухэтапном конкурсе, закрытом конкурсе. с ограниченным участием, закрытым двухэтапным конкурсом с частью 3 настоящей статьи, договор с данным участником заключается после предоставления им обеспечения исполнения контракта в размере полуторакратного размера обеспечения по исполнение контракта, указанного в закупочной документации.

(см. Текст в предыдущей редакции)

5. В случае проведения открытого конкурса в электронной форме, конкурса с ограниченным участием в электронной форме, двухэтапного конкурса в электронной форме, информация об аукционе предусмотрена в пункте 3 настоящей статьи. Настоящая статья предоставляется участником закупки при отправке подписанного проекта договора заказчику. Если такой участник, признанный победителем конкурса или аукциона, не соблюдает это требование или закупочная комиссия признает информацию, предусмотренную пунктом 3 настоящей статьи, договор с таким участником недействителен и он признается. как уклонение от заключения договора.В этом случае решение закупочной комиссии оформляется протоколом, который размещается заказчиком в единой информационной системе не позднее рабочего дня, следующего за днем подписания протокола.

(текст см. В предыдущей редакции)

6. Обеспечение, указанное в частях 1 и настоящей статье, предоставляется участником закупки, с которым заключен договор, до его заключения. Участник размещения заказа, не выполнивший это требование, считается отказавшимся от заключения договора.В этом случае уклонение участника закупки от заключения договора оформляется протоколом, который размещается в единой информационной системе и доводится до всех участников закупки не позднее рабочего дня, следующего за днем подписания протокола.

7. При проведении конкурсов с целью заключения договоров на научно-исследовательские, опытно-конструкторские или технологические работы или оказания консультационных услуг заказчик вправе установить в конкурсной документации различные значения критериев оценки заявок на участие в торгах. случаи, когда участник торгов подает заявку, содержащую предложение о цене контракта, которая:

1) до двадцати пяти процентов ниже начальной (максимальной) цены контракта;

2) на двадцать пять и более процентов ниже начальной (максимальной) цены контракта.

8. В случаях, предусмотренных пунктом 2 части 7 настоящей статьи, значимость такого критерия, как цена договора, устанавливается равной десяти процентам от суммы значений значимости всех критерии оценки заявок.

(текст см. В предыдущей редакции)

9. Если предметом договора, для заключения которого проводится тендер или аукцион, является поставка товаров, необходимых для нормального жизнеобеспечения (продукты питания, средства на случай чрезвычайных ситуаций, в том числе экстренная специализированная, медицинская помощь в экстренной или экстренной форме, медикаменты, топливо), участником закупки, предложившим контрактную цену, сумма удельных цен товаров на двадцать пять процентов и более ниже начальной (максимальной) цены контракта, начальная сумма удельных цен, наряду с требованиями, предусмотренными в настоящей статье, должна предоставить заказчику обоснование предлагаемой контрактной цены, цены за единицу товара, которая может включать гарантийное письмо от производителя с указанием цена и количество поставленных товаров (если количество поставленных товаров не может быть определено), документы, подтверждающие наличие товаров у участника закупки, другие документы и расчеты c о подтверждении способности участника акупунктуры доставить товар по предложенной цене, сумма цен на единицы товара.

(текст см. В предыдущей редакции)

1) участником закупки, предложившим цену контракта, сумма единичных цен товаров на двадцать пять процентов и более ниже начальной (максимальной) цены контракта, начальная сумма удельных цен, в составе заявки на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двухэтапном конкурсе, закрытом конкурсе, закрытом конкурсе с ограниченным участием, закрытом двухэтапном конкурсе. Если такой участник не выполняет это требование или закупочная комиссия признает предложенную цену контракта, сумма удельных цен товара является необоснованной, заявка такого участника отклоняется.Указанное решение закупочной комиссии фиксируется в протоколе рассмотрения и оценки заявок на участие в конкурсе или рассмотрения единственной заявки на участие в конкурсе;

(текст см. В предыдущей редакции)

2) участник закупки, с которым заключается договор, когда подписанный проект договора направляется заказчику в ходе открытого конкурса в электронной форме, конкурса с ограниченным участием в электронной форме, двухэтапный конкурс в электронной форме и аукцион.Если такой участник не выполняет это требование, считается, что он уклонился от заключения договора. В случае признания закупочной комиссией предложенной цены контракта, суммы удельных цен товара необоснованной, контракт с таким участником не заключается и право заключения контракта переходит к участнику закупки, предложившему ту же цену. в качестве победителя этого тендера или аукциона — цена контракта, сумма цен за единицу или предложение о цене контракта, которое содержит лучшие условия для цены контракта, в соответствии с условиями, предложенными победителем этого конкурса или аукциона.В этих случаях решение закупочной комиссии оформляется протоколом, который размещается в единой информационной системе и доводится до всех участников закупки не позднее рабочего дня, следующего за днем подписания протокола.

1. Если в ходе конкурса или аукциона начальная (максимальная) цена контракта превышает пятнадцать миллионов рублей и участник торгов, с которым заключен контракт, предлагается цена контракта, которая составляет двадцать пять процентов. или более ниже начальной (максимальной) цены контракта, либо предлагается сумма цен единиц товаров, работ, услуг, которая на двадцать пять процентов и более ниже начальной суммы цен указанных единиц , договор заключается только после предоставления такому участнику обеспечения исполнения договора в размере, превышающем в полтора раза размер обеспечения исполнения договора, указанный в документации о проведении конкурса или аукциона, но не менее суммы аванса (если договором предусмотрена предоплата).

2. Если в ходе конкурса или аукциона начальная (максимальная) цена контракта составляет пятнадцать миллионов рублей или меньше и участник торгов, с которым заключен контракт, предлагается цена контракта, которая составляет двадцать пять процентов или ниже начальной (максимальной) цены договора, либо предлагается сумма цен единиц товаров, работ, услуг, которая на двадцать пять процентов и более ниже начальной суммы цен указанных единиц, договор заключается только после предоставления таким участником исполнения договора в размере, указанном в части 1. настоящей статьи, либо сведения, подтверждающие добросовестность такого участника в соответствии с частью 3 настоящей статьи, с одновременным предоставлением таким участником принудительного исполнения договора в размере, указанном в закупочной документации.

(в ред. Федеральных законов от 27 декабря 2018 г. N 502-ФЗ, от 1 мая 2019 г. N 71-ФЗ)

3. Информация, подтверждающая добросовестность участника закупки, включает сведения, содержащиеся в реестре заключенных договоров. заказчиком и подтверждая, что такой участник выполняет его в течение трех лет до даты подачи заявки на участие в закупке трех контрактов (в порядке правопреемства), заключенных без применения к такой стороне штрафных санкций (штрафов, пени).При этом цена одного из таких контрактов должна составлять не менее двадцати процентов от начальной (максимальной) цены контракта, указанной в извещении о закупке и документации о закупке.

(часть 3 в редакции Федерального закона от 01.05.2019 N 71-ФЗ)

4. В случае открытого конкурса — конкурс с ограниченным участием, двухэтапный конкурс, закрытый конкурс, закрытый. Конкурс с ограниченным участием, закрытый двухэтапный конкурс, информация предоставлена часть 3 настоящей статьи, предоставляется участником закупки в составе заявки на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двухэтапном конкурсе, закрытом конкурсе, закрытом конкурсе с ограниченным участием, закрытом двухэтапном нежный.Закупочная комиссия отклоняет такую заявку, если указанные сведения недействительны. Решение об отклонении такой заявки фиксируется в протоколе определения поставщика (подрядчика, подрядчика) с указанием причин отклонения такой заявки и доводится до участника закупки, направившего заявку, не позднее рабочего дня, следующего за день подписания протокола. Если участником закупки по делу предусмотрена часть 2 настоящей статьи, в составе заявки на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двухэтапном конкурсе, закрытом конкурсе, закрытом конкурсе с ограниченным участием, закрытом двухэтапном конкурсе информация не предоставляется. подтверждая добросовестность в соответствии с частью 3 настоящей статьи договор с данным участником заключается после предоставления ему обеспечения исполнения договора в размере полуторакратного размера обеспечения исполнения договора, указанного в закупочной документации.

(В редакции Федеральных законов от 31 декабря 2017 г. N 504-ФЗ от 01.05.2019 N 71-ФЗ)

5. При проведении открытого конкурса в электронной форме — проведение конкурса с ограниченным участием в электронной форме. , двухэтапный конкурс в электронной форме, информация об аукционе предоставлена часть 3 настоящей статьи предоставляется участником закупки при отправке подписанного проекта договора заказчику. Если такой участник, признанный победителем конкурса или аукциона, не выполняет это требование или если закупочная комиссия признает информацию, предоставленную ч. 3 настоящей статьи, ненадежный договор с таким участником не заключается и признается уклонением от заключения договора.В этом случае решение закупочной комиссии оформляется протоколом, который размещается заказчиком в единой информационной системе не позднее рабочего дня, следующего за днем подписания протокола.

(В редакции Федерального закона от 31.12.2017 № 504-ФЗ)

6. Обеспечение, указанное в частях 1 и данная статья предоставляется участником закупки, с которым заключается договор, до его заключения. Участник размещения заказа, не выполнивший это требование, считается отказавшимся от заключения договора.В этом случае уклонение участника закупки от заключения договора оформляется протоколом, который размещается в единой информационной системе и доводится до всех участников закупки не позднее рабочего дня, следующего за днем подписания протокола.

1) до двадцати пяти процентов ниже начальной (максимальной) цены контракта;

2) на двадцать пять и более процентов ниже начальной (максимальной) цены контракта.

8. В случаях, предусмотренных абзацем 2 части 7 В данной статье величина значимости такого критерия, как цена договора, устанавливается равной десяти процентам от суммы величины значимости всех критериев оценки заявок.

(в ред. Федерального закона от 28 декабря 2013 г. N 396-ФЗ)

9. Если предметом договора, для заключения которого проводится конкурс или аукцион, является поставка товаров, необходимых для нормальное жизнеобеспечение (питание, средства на случай чрезвычайной ситуации, в том числе специализированные, медицинская помощь в неотложной или неотложной форме, медикаменты, топливо), участник закупки, предложивший контрактную цену, сумма удельных цен товаров составляет двадцать пять процентов или более низкая, чем начальная (максимальная) цена контракта, начальная сумма единичных цен, наряду с требованиями, предусмотренными в настоящей статье, должна предоставить заказчику обоснование предлагаемой контрактной цены, цены единицы товара, которая может включать гарантийное письмо от производителя с указанием цены и количества поставленных товаров (если количество поставленных товаров не может быть определено), документы, подтверждающие наличие товаров у участника закупки, другие • документы и расчеты, подтверждающие способность участника акупунктуры доставить товар по предложенной цене, сумме цен на единицы товара.

(в ред. Федеральных законов от 01.05.2019 N 71-ФЗ, от 27.06.2019 N 152-ФЗ)

1) участником закупки, предложившим цену контракта, сумма цен за единицу товара составляет двадцать -пять процентов и более ниже начальной (максимальной) цены контракта, начальной суммы удельных цен, в составе заявки на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двухэтапном конкурсе, закрытом конкурсе, закрытом конкурс с ограниченным участием, закрытый двухэтапный конкурс.Если такой участник не выполняет это требование или закупочная комиссия признает предложенную цену контракта, сумма удельных цен товара является необоснованной, заявка такого участника отклоняется. Указанное решение закупочной комиссии фиксируется в протоколе рассмотрения и оценки заявок на участие в конкурсе или рассмотрения единственной заявки на участие в конкурсе;

(В редакции Федерального закона от 01.05.2019 N 71-ФЗ)

2) участнику размещения заказа, с которым заключен договор, при отправке подписанного проекта договора заказчику в ходе открытого конкурса в электронной форме, конкурса с ограниченным участием в электронной форме, двух- этап конкурса в электронной форме и аукцион. Если такой участник не выполняет это требование, считается, что он уклонился от заключения договора. В случае признания закупочной комиссией предложенной цены контракта, суммы удельных цен товара необоснованной, контракт с таким участником не заключается и право заключения контракта переходит к участнику закупки, предложившему ту же цену. в качестве победителя этого тендера или аукциона — цена контракта, сумма цен за единицу или предложение о цене контракта, которое содержит лучшие условия для цены контракта, в соответствии с условиями, предложенными победителем этого конкурса или аукциона.В этих случаях решение закупочной комиссии оформляется протоколом, который размещается в единой информационной системе и доводится до всех участников закупки не позднее рабочего дня, следующего за днем подписания протокола.

(в ред. Федерального закона от 01.05.2019 N 71-ФЗ)

(В редакции Федерального закона от 31.12.2017 № 504-ФЗ)

11. В случае если победитель конкурса при отказе участника конкурса или аукциона от заключения договора с участником размещения заказа, с которым договор заключен в соответствии с положениями настоящего Федерального закона, применяются требования настоящей статьи в полном объеме.

12. Положения настоящей статьи не применяются, если при закупке лекарственных средств, включенных в утвержденный Правительством Российской Федерации перечень жизненно важных лекарственных средств, участник торгов, с которым заключен договор, предлагается цена на все приобретаемые лекарственные средства, сниженная не более чем на двадцать пять процентов относительно их зарегистрированной в соответствии с законодательством об обращении лекарственных средств максимальной отпускной ценой.

«О контрактной системе в сфере закупок товаров, работ, услуг для обеспечения государственных и муниципальных нужд»

(с изменениями) Закон о контрактной системе в сфере закупок товаров, работ и услуг для обеспечения государственных и муниципальных нужд призван заменить Закон о размещении государственных (муниципальных) заказов.

Особое внимание уделяется планированию, оценке их достоверности.

Должен ли победитель платить за обеспечение исполнения контракта при снижении НМТСК на 25% и более, если Заказчик не установил требование о предоставлении обеспечения исполнения контракта?

Наша компания выиграла аукцион.

2.1 Арт. 96 Федерального закона «О контрактной системе в сфере закупки товаров, работ, услуг для обеспечения государственных и муниципальных нужд» заказчик не установил исполнение контракта.

Статья 37 44 ФЗ с последними изменениями

Разные темы Сообщений Последнее сообщение

Разное.
Покупка В этом разделе обсуждаются вопросы, выходящие за рамки остальных разделов, но связанные с покупками и продажами. Модератор: Юлия Подфорум: Вопросы финансов, налогов, отчетов в сфере закупок.
Системы поиска и автоматизации закупок.

Федеральный закон № 44-ФЗ «О контрактной системе в сфере закупок товаров, работ, услуг для обеспечения государственных и муниципальных нужд»

Федеральный закон от 05.04.2013 N 44-ФЗ «О контрактной системе в сфере закупок товаров, работ, услуг для обеспечения государственных и муниципальных нужд» Контрактная система государственных закупок. Именно она была введена законом 44 Федерального закона. С 1 января 2014 года, с момента вступления в силу этого документа, в российском бизнесе и правовой действительности появился термин «контрактная система».

До этого момента основным нормативным документом для госслужащих и госорганов был другой федеральный закон — 94-ФЗ.

1. Если в ходе конкурса или аукциона начальная (максимальная) цена контракта превышает пятнадцать миллионов рублей и участник, с которым заключен контракт, предлагает цену контракта, которая составляет двадцать пять процентов и более. ниже начальной (максимальной) цены контракта, контракт заключается только после предоставления такому участнику обеспечения исполнения контракта в размере, превышающем полуторакратный размер обеспечения исполнения контракта указанной в документации по конкурсу или аукциону, но не менее размера авансового платежа (если авансовый платеж предусмотрен контрактом).

44 Федеральный закон о закупках с последними изменениями

Мы всегда отслеживаем все изменения в законодательстве и публикуем для вас только самую актуальную информацию. Вся только самая необходимая информация, которую должен пройти каждый участник торгов в соответствии с 44 Федеральным законом. Как известно, 44 Федерального закона предусматривает ответственность за несоблюдение его положений как поставщиками, так и государственными заказчиками в любой из форм, указанных в Законе.

1) описание объекта закупки должно быть объективным.В описании объекта закупки указываются функциональные, технические и качественные характеристики, эксплуатационные характеристики объекта закупки (при необходимости).

Описание объекта закупки не должно содержать требований или указаний относительно товарных знаков, знаков обслуживания, наименований компаний, патентов, полезных моделей, промышленных образцов, наименования места происхождения товара или наименования производителя, а также требования к товарам, информации, работам, услугам при условии, что такие требования влекут за собой ограничение количества участников закупки, если не указано иное, что обеспечивает более точное и понятное описание характеристик объекта закупки.

Статья 37. Антидемпинговые меры при проведении конкурса и аукциона

1. Если в ходе конкурса или аукциона начальная (максимальная) цена контракта превышает пятнадцать миллионов рублей и участник торгов, с которым заключен контракт, предлагается цена контракта, которая составляет двадцать пять процентов. или более ниже начальной (максимальной) цены контракта, либо предлагается сумма цен единиц товаров, работ, услуг, которая на двадцать пять процентов и более ниже начальной суммы цен указанных единиц , договор заключается только после предоставления такому участнику обеспечения исполнения договора в размере, превышающем в полтора раза размер обеспечения исполнения договора, указанный в документации о проведении конкурса или аукциона, но не менее суммы аванса (если договором предусмотрена предоплата).

2. Если в ходе конкурса или аукциона начальная (максимальная) цена контракта составляет пятнадцать миллионов рублей или меньше и участник торгов, с которым заключен контракт, предлагается цена контракта, которая составляет двадцать пять процентов и более. ниже начальной (максимальной) цены контракта, либо предлагается сумма цен единиц товаров, работ, услуг, которая на двадцать пять процентов и более ниже первоначальной суммы цен этих единиц, заключается договор только после предоставления таким участником обеспечения исполнения договора в размере, указанном в части 1 настоящей статьи, или сведений, подтверждающих добросовестность такого участника в соответствии с частью 3 настоящей статьи, с одновременным предоставлением таким участником участник исполнения контракта в размере исполнения контракта, указанном в закупочной документации.

3. Информация, подтверждающая добросовестность участника закупки, включает информацию, содержащуюся в реестре договоров, заключенных заказчиками, и подтверждающую, что такой участник выполнил ее в течение трех лет до даты подачи заявки на участие в закупке трех договоров (при условии к наследованию), оформленные без применения к такой стороне штрафных санкций (пеней, пеней). При этом цена одного из таких контрактов должна составлять не менее двадцати процентов от начальной (максимальной) цены контракта, указанной в извещении о закупке и документации о закупке.

4. В случае проведения открытого конкурса, конкурса с ограниченным участием, двухэтапного конкурса, закрытого конкурса, закрытого конкурса с ограниченным участием, закрытого двухэтапного конкурса — информация, предусмотренная в пункте 3 настоящей статьи. Статья предоставляется участником закупки в составе заявки на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двухэтапном конкурсе, закрытом конкурсе, закрытом конкурсе с ограниченным участием, закрытом двухэтапном конкурсе.Закупочная комиссия отклоняет такую заявку, если указанные сведения недействительны. Решение об отклонении такой заявки фиксируется в протоколе определения поставщика (подрядчика, подрядчика) с указанием причин отклонения такой заявки, сообщается участнику закупки, направившему заявку, не позднее рабочего дня, следующего за день подписания протокола. Если участник закупки в случае, предусмотренном пунктом 2 настоящей статьи, не предоставит информацию, подтверждающую его добросовестность, в соответствии с формой заявки на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двухэтапном конкурсе, закрытом конкурсе. с ограниченным участием, закрытым двухэтапным конкурсом с частью 3 настоящей статьи, договор с данным участником заключается после предоставления им обеспечения исполнения контракта в размере полуторакратного размера обеспечения по исполнение контракта, указанного в закупочной документации.

5. В случае проведения открытого конкурса в электронной форме, конкурса с ограниченным участием в электронной форме, двухэтапного конкурса в электронной форме, а также информация об аукционе, предусмотренная пунктом 3 настоящей статьи, предоставляется участником размещения заказа. при отправке подписанного проекта договора заказчику. Если такой участник, признанный победителем конкурса или аукциона, не соблюдает это требование или закупочная комиссия признает информацию, предусмотренную пунктом 3 настоящей статьи, договор с таким участником недействителен и он признается. как уклонение от заключения договора.В этом случае решение закупочной комиссии оформляется протоколом, который размещается заказчиком в единой информационной системе не позднее рабочего дня, следующего за днем подписания протокола.

6. Обеспечение, указанное в частях 1 и 2 настоящей статьи, предоставляется участником закупки, с которым заключается договор, до его заключения. Участник размещения заказа, не выполнивший это требование, считается отказавшимся от заключения договора.В этом случае уклонение участника закупки от заключения договора оформляется протоколом, который размещается в единой информационной системе и доводится до всех участников закупки не позднее рабочего дня, следующего за днем подписания протокола.

7. При проведении конкурсов с целью заключения договоров на научно-исследовательские, опытно-конструкторские или технологические работы или оказания консультационных услуг заказчик вправе установить в конкурсной документации различные значения критериев оценки заявок по делам когда участник торгов подает заявку, содержащую предложение о цене контракта, которая:
1) до двадцати пяти процентов ниже начальной (максимальной) цены контракта;
2) на двадцать пять и более процентов ниже начальной (максимальной) цены контракта.

9. Если предметом контракта, для заключения которого проводится тендер или аукцион, является поставка товаров, необходимых для нормального жизнеобеспечения (питание, средства на случай чрезвычайной ситуации, в том числе экстренной специализированной, медицинская помощь в экстренных случаях или аварийная форма, лекарства, топливо), участник закупки, предложивший цену контракта, сумма цен за единицу товара на двадцать пять процентов и более ниже начальной (максимальной) цены контракта, начальная сумма цен за единицу наряду с требованиями, предусмотренными в настоящей статье, должен предоставить заказчику обоснование предлагаемой контрактной цены, цену за единицу товара, которая может включать гарантийное письмо от производителя с указанием цены и количества поставленных товаров (если количество поставленных товаров не может быть определено), документы, подтверждающие наличие товара у участника закупки, другие документы и расчеты, подтверждающие способность участника к иглоукалыванию t o доставить товар по предложенной цене, сумме цен единиц товара.

10. В обоснование, указанное в пункте 9 настоящей статьи, представляется:

1) участником закупки, предложившим контрактную цену на двадцать пять процентов и более ниже начальной (максимальной) контрактной цены, в составе заявки на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двух- этапный конкурс, закрытый конкурс, закрытый конкурс с ограниченным участием, закрытый двухэтапный конкурс. Если такой участник не выполняет это требование или закупочная комиссия признает предложенную цену контракта необоснованной, заявка такого участника отклоняется.Указанное решение закупочной комиссии фиксируется в протоколе рассмотрения и оценки заявок на участие в конкурсе или рассмотрения единственной заявки на участие в конкурсе;

1) участником закупки, предложившим цену контракта, сумма цен за единицу товара на двадцать пять процентов и более ниже начальной (максимальной) цены контракта, начальной суммы цен за единицу, в рамках заявка на участие в открытом конкурсе, конкурсе с ограниченным участием, двухэтапном конкурсе, закрытом конкурсе, закрытом конкурсе с ограниченным участием, закрытом двухэтапном конкурсе.Если такой участник не выполняет это требование или закупочная комиссия признает предложенную цену контракта, сумма удельных цен товара является необоснованной, заявка такого участника отклоняется. Указанное решение закупочной комиссии фиксируется в протоколе рассмотрения и оценки заявок на участие в конкурсе или рассмотрения единственной заявки на участие в конкурсе;

2) участник закупки, с которым заключается договор, когда подписанный проект договора направляется заказчику в ходе открытого конкурса в электронной форме, конкурса с ограниченным участием в электронной форме, двухэтапного конкурса в электронной форме, и аукцион.Если такой участник не выполняет это требование, считается, что он уклонился от заключения договора. В случае признания закупочной комиссией предложенной цены контракта, суммы удельных цен товара необоснованной, контракт с таким участником не заключается и право заключения контракта переходит к участнику закупки, предложившему ту же цену. в качестве победителя этого тендера или аукциона — цена контракта, сумма цен за единицу или предложение о цене контракта, которое содержит лучшие условия для цены контракта, в соответствии с условиями, предложенными победителем этого конкурса или аукциона.В этих случаях решение закупочной комиссии оформляется протоколом, который размещается в единой информационной системе и доводится до всех участников закупки не позднее рабочего дня, следующего за днем подписания протокола.

11. В случае отказа победителя конкурса или аукциона о расторжении договора с участником размещения заказа, с которым заключается договор в соответствии с положениями настоящего Федерального закона, применяются требования настоящей статьи в полном объеме. .

12. Положения настоящей статьи не применяются, если при закупке лекарственных средств, включенных в утвержденный Правительством Российской Федерации перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных средств, участник торгов, с которым заключен договор, оказывается предложили цену на все приобретаемые лекарственные средства, сниженную не более чем на двадцать пять процентов относительно их максимальной отпускной цены, зарегистрированной в соответствии с законодательством об обращении лекарственных средств.

13.Аванс при исполнении договора, заключенного с участником размещения заказа, указанным в частях 1 или 2 настоящей статьи, не допускается.

Анализ законодательных мер по ограничению демпинга, применяемых Правительством России в рамках статьи 37 статьи 44 Федерального закона «О государственных закупках».

Что такое демпинговые и антидемпинговые меры

С помощью «Современного экономического словаря» проясняется суть определения «демпинг» (по-английски dumping — это демпинг).Это продажа товаров по искусственно заниженным ценам, ниже средних розничных, а иногда и ниже себестоимости. Участники рынка сбрасываются, как правило, с определенными целями — проникнуть на рынок, укрепить завоеванные позиции, вытеснить конкурентов.

Для противодействия этому явлению приняты индивидуальные антидемпинговые нормы закона. Примером может служить статья 37 Федерального закона от 05.04.2013 № 44-ФЗ «О контрактной системе в сфере закупки товаров, работ, услуг для обеспечения государственных и муниципальных нужд» (далее — 44-ФЗ), который предусматривает последствия для участника торгов или аукциона, предложившего цену контракта на 25% или более ниже установленной начальной цены.Какие именно последствия зависят от размера начальной цены контракта.

Суть статьи 37 Закона № 44-ФЗ

Итак, 37 статья 44-ФЗ предусматривает:

№

при начальной цене контракта выше 15 млн руб. Участник закупки должен будет предоставить обеспечение в увеличенной сумме (в полтора раза больше указанной в документации по конкурсу или аукциону). Если предусмотрена предоплата, то размер залога должен быть не менее аванса;

Если начальная цена контракта составляет 15 миллионов рублей и менее, то участнику процедур закупки предоставляется выбор — либо предоставить обеспечение в большей сумме (как указано выше), либо документально подтвердить покупателя его добросовестностью.

В случае, когда цена контракта больше 15 млн рублей, все более-менее понятно — участник закупки предоставляет либо банковскую гарантию, либо более высокий размер обеспечения. А часть статьи, предусматривающая предоставление информации о добросовестности участника закупки, иногда вызывает вопросы практического применения. 37 В статье 44-ФЗ четко прописано, какая информация из реестра должна предоставляться (о том, какие контракты заключаются и в какие сроки).Таким образом, заказчик выбирает участников, которые хотят играть против правил. Те. если компания снижает цену ниже установленного порога, заказчик в соответствии с антидемпинговыми процедурами должен иметь возможность убедиться в том, что участник закупки выполнил контракты без штрафных санкций, что он может выполнить взятые на себя по этому приказу обязательства. Таким образом снижаются риски столкновения заказчика с недобросовестными компаниями, использующими демпинг в своих интересах.

Спорные ситуации

Форма и порядок предоставления такой информации заказчику иногда являются причиной споров между заказчиком и участником закупки.Например:

Участник, цена предложения которого была снижена более чем на четверть первоначальной цены, предоставил заказчику информацию в виде таблицы с данными о контрактах, которые были заключены и исполнены победителем в течение года, предшествующего дату покупки. Но заказчик посчитал, что этой информации недостаточно, отказался заключать с ним договор, заявив, что необходимо предоставить копии договоров, заключенных участником.Спор решается в судебном порядке, позиция заказчика признана незаконной, не на основании статьи 37 Закона № 44-ФЗ. Статья 44-ФЗ не содержит требований о предоставлении копий документов по заключенным договорам (решение Арбитражного суда Ульяновской области от 04.10.2015 по делу № А72-18158 / 2014).

Арбитражный суд Ханты-Мансийского автономного округа — Югры рассмотрел спор между заказчиком и участником, заявлению которого присвоен второй номер, о применении антидемпинговых мер.Заказчик считал, что если контракт с ним заключен из-за уклонения победителя, то в обеспечении повышенной безопасности нет необходимости. Суд пояснил, что если второй участник будет признан выигравшим процедуру, то к нему распространяются все требования, установленные для победителя аукциона, в том числе требования по применению антидемпинговых правил по ст. 37 Закона № 44-ФЗ (решение Арбитражного суда Ханты-Мансийского автономного округа — Югры от 02.04.2015 по делу №A75-2002 / 2015).

Что искать

Если участник выбирает способ предоставления заказчику информации о своих добросовестных намерениях, то помимо существующего судебного разбирательства необходимо учитывать следующие моменты:

Если участник закупки, снизивший цену, не предоставляет информацию о себе в соответствии со ст. 37 (или такая информация недостоверна), а также не оправдывает соответственно предложенную цену контракта, это будет причиной внесения ее в «черный список» (признать уклоняющимся от заключения контракта).Это право предоставлено ч. 13 ст. 70 Закона № 44-ФЗ.

Даже если участник предоставил информацию, это не освобождает его от необходимости оформлять принудительное исполнение контракта в размере, который изначально был установлен в извещении или закупочной документации.

Антидемпинговые меры при отдельных видах закупок

37 Статья 44-ФЗ содержит особые виды антидемпинговых мер при проведении закупочных процедур для заключения следующих договоров:

НИОКР;

консультационные услуги;

на поставку товаров для нормальной жизнедеятельности, Сюда входит поставка продуктов питания, средств на экстренную (экстренную специализированную) медицинскую помощь в экстренной или экстренной форме, медикаменты, топливо).Участник закупки товаров для жизнеобеспечения, снижая цену ниже установленного порога от начальной цены договора, предоставляет обоснование предложенной им цены. Он может включать гарантийное письмо производителя, где вы можете увидеть информацию о цене и количестве поставленных товаров, документы, из которых ясно, что товары доступны, или другие документы и расчеты, которые убеждают покупателя в способности участника закупки доставить товар по его предложенной цене.

Введение антидемпинговых мер способствует защите интересов не только заказчиков, но и участников закупок от недобросовестных юридических лиц, подающих заявки в процедурах закупок, а также является воплощением принципа добросовестной конкуренции при закупках.

Аналитика ЭЭГ для раннего выявления расстройства аутистического спектра: подход, основанный на данных

Участники

Участники были младенцами, включенными в одобренное IRB совместное лонгитюдное исследование, проведенное в Бостонской детской больнице / Гарвардской медицинской школе и Бостонском университете.Все компоненты исследования были одобрены наблюдательными советами IRB в обоих учреждениях и подпадают под руководящие принципы IRB, утвержденные обоими учреждениями. Письменное информированное согласие было предоставлено родителями или опекунами до участия их ребенка в исследовании.

Участники классифицируются на одну из трех групп результатов на основании их исходной группы набора в семью и клинического определения того, был ли у ребенка положительный или отрицательный диагноз РАС в конце исследования.Согласно скрининговому опроснику, у младенцев в группе набора семей с низким уровнем риска (LRC) был по крайней мере один типично развивающийся старший брат или сестра и не было родственников первой степени родства с известным нарушением развития. Младенцы, отобранные в группу набора с высоким риском развития РАС (HRA), имели старшего брата или сестру с диагнозом РАС (не из-за известного генетического заболевания, например, синдрома ломкой Х-хромосомы). У всех старших братьев и сестер был экспертный диагноз клинического сообщества, который был подтвержден членом исследовательского персонала с помощью опросника социальной коммуникации (SCQ) ²³ или Таблицы диагностики аутизма (ADOS-2) ²⁴.После зачисления младенцев планировали посещать в возрасте от 3 до 36 месяцев. Были включены дети, которые выполнили по крайней мере два визита (запланированные на 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36 месяцев) и завершили одно посещение в 18 месяцев или позже, во время которого им была дана клиническая оценка на РАС. в этом исследовании. Большинство младенцев прошли последнюю 36-месячную оценку на предмет РАС.

Было 3 группы результатов: LRC-: младенцы из группы низкого риска, которым не был поставлен диагноз РАС; HRA-: младенцы из группы высокого риска, которым не был поставлен диагноз РАС; РАС: младенцы из любой группы набора, которым был поставлен диагноз РАС.В таблице 1 показано количество участников в каждой из семейных групп набора, их распределение по группам результатов и количество участников в каждом возрасте. Обратите внимание, что не все участники предоставляли данные при каждом запланированном посещении. Распределение возрастов для последнего клинического диагноза также показано в Таблице 1.

Таблица 1 Распределение 188 участников из каждой из семейных групп набора показано (а) исходами и (б) количеством доступных измерений ЭЭГ. для анализа с каждого оценочного возраста.

Клиническая оценка

Диагнозы РАС для участников были основаны на ADOS ²⁴ и экспертном клиническом заключении через 18, 24 или 36 месяцев, в зависимости от того, что наступит позднее. ADOS — это полуструктурированная стандартизированная оценка, которая состоит из социальных и игровых действий, направленных на выявление моделей поведения, связанных с диагностикой РАС. В дополнение к бинарной диагностике РАС или отсутствия РАС, для каждого участника из ADOS была получена калиброванная оценка степени тяжести (CSS) с числовым диапазоном 1–10.CSS предлагает метод количественной оценки тяжести РАС с относительной независимостью от индивидуальных характеристик, таких как возраст и вербальный IQ ²⁵.

Тестом ADOS управляли научные сотрудники с большим опытом тестирования детей с нарушениями развития, а также совместно с надежным исследователем ADOS с помощью видеозаписи. Случаи, вызывающие озабоченность (те, которые соответствуют критериям ADOS или находятся в пределах 3 пунктов отсечения), были рассмотрены лицензированным клиническим психологом, который оценил видеозаписи поведенческих оценок вместе с баллами этих оценок, чтобы сделать окончательное клиническое заключение: клиническая проблема отсутствует / обычно развивающиеся, РАС или не связанные со спектром проблемы (например,g., симптомы СДВГ, беспокойство, задержка речевого развития). Младенцы включались в группу РАС, если у них был балл CSS 4 или выше и они получили окончательное клиническое заключение о РАС. В общей сложности 150 участников прошли окончательную клиническую оценку через 36 месяцев, 23 участника через 24 месяца и 15 участников через 18 месяцев.

Окончательные диагностические результаты и измерения ЭЭГ по крайней мере в результате двух посещений были доступны у 188 детей и были включены в это исследование. Для целей данного исследования все посещения рассматривались как независимые встречи.Например, все измерения ЭЭГ, сделанные во время 12-месячных посещений, использовались для прогнозирования результатов независимо от измерений, выполненных в другом возрасте для того же участника. Хотя анализ траектории роста выходил за рамки этого исследования, мы выполнили один классификационный тест, объединив измерения за 6 и 9 месяцев в единый набор характеристик для субъектов, которые посещали как 6, так и 9 месяцев.

Процедура сбора ЭЭГ

Младенцы сидели на коленях у матери в тускло освещенной комнате для тестирования с электрической и звукоизоляцией.Экспериментатор находился в комнате и выдувал пузыри на протяжении всей процедуры, чтобы поддерживать интерес младенцев, ограничивать движения и повышать переносимость электродной сетки. Голову ребенка измерили и отметили моющимся восковым карандашом, чтобы обеспечить точное размещение сетки, которую затем поместили на кожу головы. Перед установкой сенсорной сетки на кожу головы губки замачивали в растворе электролита (6 см3 KCL / литр дистиллированной воды) для облегчения электрического контакта между кожей головы и соответствующим электродом.Сопротивление скальпа было проверено в режиме онлайн с помощью программного обеспечения NetStation (EGI, Inc, Eugene OR), пакета программного обеспечения для записи, на котором работает эта система. Для большинства участников были записаны как минимум две минуты базовой активности, но в зависимости от желания младенца периоды записи могли быть ограничены двумя минутами.

Непрерывная ЭЭГ была записана с использованием либо 64-канальной геодезической сенсорной сети, либо 128-канальной геодезической сенсорной сети HydroCel (Electrical Geodesics Inc., Юджин, Орегон; https: // www.egi.com/research-division/geodesic-sensor-net) ссылка на вершину (Cz) в Интернете. Данные были усилены, отфильтрованы (полоса пропускания 0,1-100,0 Гц) и дискретизированы с частотой 250 Гц или 500 Гц. Последние были субдискретизированы до 250 Гц перед дальнейшим анализом. Сигналы оцифровывались с помощью 12-битной системы National Instruments Board (National Instruments Corp., Woburn MA). В нашем анализе использовались данные с 19 датчиков, равномерно распределенных по коже головы. Расположение датчиков, выбранных для анализа, — стандартный монтаж 10–20: Fp1, Fp2, F7, F3, Fz, F4, F8, T7, C3, Cz, C4, T8, P7, P3, Pz, P4, P8, О1, О2.Одно и то же подмножество датчиков использовалось независимо от того, какая геодезическая сеть датчиков использовалась для измерения данных.

Анализ данных ЭЭГ

Каждая из выборок ЭЭГ обрабатывалась идентичным образом с помощью следующих шагов. От начала каждой записи ЭЭГ для каждого испытуемого, когда ребенок сидел тихо, выбирались непрерывные 30-секундные сегменты. Никакого сращивания сегментов или выбора на основе обзора не производилось.

Полосы частот

Сигнал или временной ряд от каждого датчика был разложен на несколько частотных диапазонов с использованием вейвлет-преобразования ²⁶.Отметим, что вейвлет-преобразование Хаара дает многомасштабную декомпозицию, которая математически эквивалентна процедуре грубой зернистости, введенной Коста и др. . ²⁷ для многомасштабного энтропийного анализа биологических сигналов. Процедура крупнозернистой декомпозиции сигнала использовалась в предыдущих исследованиях для многомасштабного энтропийного анализа ЭЭГ ²⁸. В настоящем исследовании мы использовали вейвлет Добеши (DB4), который очень похож на вейвлет Хаара, но чаще используется для анализа сигналов ²⁹.

Используя вейвлет-преобразование, каждый сигнал датчика разлагается на шесть частотных диапазонов степени двойки, которые приблизительно равны обычно используемым определениям диапазонов дельта, тета, альфа, бета, гамма и гамма +, используемым для анализа ЭЭГ. Специальное программное обеспечение, используемое для вейвлет-преобразования, общедоступно вместе с инструкциями и кодом Python по адресу: https://pywavelets.readthedocs.io. В таблице 2 показаны шесть полос частот, использованных в этом исследовании. В оставшейся части этого документа будут использоваться стандартные обозначения частотных диапазонов, но они относятся конкретно к полосам мощности двух, показанным в таблице 2.

Таблица 2 Необработанные сигналы ЭЭГ собираются с частотой дискретизации 256 выборок в секунду, затем разлагаются по степеням двойки на полосы частот, показанные с использованием вейвлет-разложения. Результирующие полосы частот приблизительно эквивалентны стандартным обозначениям частотных полос ЭЭГ.

Характеристики нелинейных сигналов

Девять нелинейных характеристик были вычислены для каждой из полос частот, полученных от каждого из 19 датчиков, используемых в нашем анализе. Был вычислен широкий спектр нелинейных характеристик, чтобы дать как можно более полную характеристику динамики сигнала.Вычислено включенных характеристик:

(я)
Семь значений, полученных на основе количественного анализа повторяемости (RQA). RQA — это эмпирический подход к анализу данных временных рядов, который в принципе способен охарактеризовать всю существенную динамику сложной системы. Было обнаружено, что он полезен для анализа «реальных, шумных, многомерных данных» ³⁰. Программное обеспечение для вычисления статистики графика повторяемости общедоступно в пакете python pyRQA 0.1.0 ³¹. Более полное обсуждение анализа RQA можно найти в литературе ^30,32. Семь из наиболее часто используемых значений графика повторяемости (RR, DET, LAM, L_max, L_entr, L_mean и TT) были вычислены и использованы в этом исследовании.
(ii)
Энтропия выборки и анализ колебаний без тренда, обозначенные SampE и DFA, соответственно, также были рассчитаны.Энтропия выборки была единственной нелинейной характеристикой, использованной в нашем предыдущем анализе подмножества данных, проанализированных для этого исследования ³³. DFA количественно определяет другое свойство сигнала и является мерой «долговременной памяти» временного ряда. Его можно использовать для определения того, увеличится ли временной ряд с большей, меньшей или равной вероятностью, если он увеличился на предыдущих шагах. SampE и DFA были рассчитаны с использованием общедоступного программного обеспечения « Нелинейные меры для динамических систем» или nolds, версия 0.3.2, который можно загрузить с (https://pypi.python.org/pypi/nolds).

Эти 9 показателей и их общее значение суммированы в таблице 3. В принципе, эти показатели характеризуют динамические характеристики временных рядов ЭЭГ, которые должны коррелировать с функциональными характеристиками нейронной сети или мозга, создавшей временной ряд. Хотя эти меры являются общепризнанными физическими и математическими величинами, их значение в контексте нейроники только недавно начали изучаться.Насколько нам известно, это исследование является первым применением RQA и других описанных здесь мер к нейробиологии развития.

Таблица 3 Нелинейные инвариантные меры временного ряда и их физическая интерпретация.

Выбор и классификация характеристик

Общий набор характеристик, вычисленный из каждого сеанса ЭЭГ, состоит из 9 нелинейных значений, вычисленных по 6 шкалам или полосам частот для каждого из 19 датчиков, всего 1026 характеристик. Многие из этих функций, вероятно, будут коррелированы.Например, пространственно близкие датчики могут иметь коррелированные свойства сигнала. SampE и L_entr — оба показателя энтропии, хотя и получены с помощью совершенно разных алгоритмов. Обнаружение наиболее информативных функций для прогнозирования возникающих РАС было выполнено с использованием методов ранжирования признаков.

Несколько различных алгоритмов обучения были первоначально протестированы и сравнены для этого исследования, включая k ближайших соседей, случайный лес и машину опорных векторов. Было обнаружено, что все они дали одинаковые результаты классификации.В оставшейся части этой статьи все результаты классификации и прогнозирования были вычислены с использованием метода опорных векторов (SVM) с радиальными базисными функциями. Выбор функций производился с помощью алгоритма исключения рекурсивных функций, как описано в ³⁴, с использованием метода rfecv в пакете Python с открытым исходным кодом scikit-learn (www.scikit-learn.org). Scikit-learn использовался для всех вычислений машинного обучения со всеми параметрами по умолчанию.

Прогнозирование РАС и тяжести симптомов

Прогноз результатов бинарной диагностики, либо РАС, либо не-РАС, был вычислен на основе нелинейных характеристик, описанных выше, с использованием процедуры перекрестной проверки с исключением по одному.Процедура перекрестной проверки проиллюстрирована на рис. 2 с использованием трех измерений для представления трех характеристик. Порядок действий следующий.

Рисунок 2

Схематическое представление классификации с помощью метода опорных векторов (SVM) показано с 3 измерениями, представляющими 3 функции. Обучающий набор используется для создания модели или разделения гиперплоскости в пространстве элементов. Оси пространства признаков — это нелинейные признаки ЭЭГ. Затем испытуемые классифицируются, определяя, с какой стороны плоскости их помещают черты лица.В тренировочном наборе используются ASD и LRC-предметы. Перекрестная проверка с исключением одного предмета исключает один предмет из обучающей выборки, а затем делает прогноз для оставшегося предмета. Расстояние от объекта до гиперплоскости можно использовать для оценки серьезности. Это расстояние было масштабировано для приближения к калиброванной шкале тяжести (CSS), где 1,0 — это самый низкий балл для детей без симптомов аутизма, а 10 — наивысший балл для наиболее тяжелых случаев аутизма.

Обучающий набор используется для поиска модели или разделяющей гиперплоскости, которая делит пространство элементов пополам.Метод SVM — это формальный алгоритм поиска плоскости, которая лучше всего разделяет две группы. Плоскость, разделяющая две группы, показана на рис. 2. Отметим, что оси на этом рисунке представляют нелинейные особенности ЭЭГ. На практике размерностей столько же, сколько и функций. Обучающий набор данных, содержащий точки данных для каждой группы результатов, используется для определения плоскости. Затем новые точки данных можно классифицировать, используя их особенности ЭЭГ, чтобы определить местоположение в пространстве признаков, которое находится на одной или другой стороне плоскости.

В идеале обучающий набор представляет собой большой набор, используемый для поиска плоскости модели, а тестовый набор — это совершенно новый набор субъектов, которые классифицируются для определения чувствительности и специфичности модели. Когда такие большие независимые наборы данных недоступны, перекрестная проверка — это процесс, при котором один субъект исключается из обучающего набора, а полученная плоскость затем используется для классификации оставленного субъекта. Этот процесс повторяется для каждого предмета. По нашим данным, субъекты ASD и LRC− используются для обучающей выборки со схемой перекрестной проверки с исключением по одному.Предметы HRA− также классифицируются с использованием всех предметов ASD и LRC− для обучающей выборки. Таким образом, результат каждого предмета прогнозируется на основе данных, полученных от других предметов той же возрастной группы. Затем этот прогноз можно сравнить с известным результатом и определить как истинно положительный, истинно отрицательный, ложноположительный или ложноотрицательный. Чувствительность, специфичность и PPV вычисляются из этих величин со стандартными определениями.

Расстояние от объекта до гиперплоскости можно использовать для оценки серьезности.Это расстояние было масштабировано для приближения к калиброванной шкале тяжести (CSS), где 1,0 — это самый низкий балл для детей без симптомов аутизма, а 10 — наивысший балл для наиболее тяжелых случаев аутизма. Для прогнозирования значений CSS использовались те же обучающие наборы и перекрестная проверка исключения по одному, что и для классификации двоичных результатов.

Тестирование значимости

Значимость результатов классификации для каждого метода оценивалась эмпирически с использованием подхода перестановок, описанного в ³⁵.Поскольку точность классификации была высокой, эмпирическое значение p в каждом случае было 0, или p <0,01, поскольку использовалось 100 испытаний.

Мультимасштаб и диапазоны частот

Мультимасштабная энтропия впервые была описана Коста и др. . ²⁷ как метод анализа физиологических сигналов. В процедуре масштабирования обычно используется алгоритм грубого зерна или усреднения, показанный на рис. 3. Для масштабов степени двойки (2, 4, 8, 16,…) временные ряды, полученные с помощью этой процедуры, идентичны вейвлет-преобразованию Хаара. ²⁶.Многомасштабный анализ применяется ко всем показателям, вычисленным в этой статье, включая выборочную энтропию, которая является основной мерой многомасштабной энтропии.

Рис. 3

Процедура грубого измельчения, введенная Коста и др. . ²⁷ проиллюстрировано. Для степеней двойки результирующие масштабированные временные ряды идентичны приближениям вейвлет-преобразования Хаара.

Связь между алгоритмом грубой зернистости и вейвлетами важна, потому что многое известно о свойствах вейвлет-преобразований.В частности, вейвлеты могут быть связаны с общими частотными диапазонами. Например, если сигнал ЭЭГ имеет частоту дискретизации 256 Гц, то сигнал содержит частоты до 128 Гц, как определено стандартным пределом Найквиста ³⁶. Масштаб 2 в процедуре грубой зернистости эквивалентен уровню 1 вейвлет-аппроксимации и содержит все частоты до половины исходного сигнала, от 0 до 64 Гц. Процесс усреднения удалил самые высокие частоты. Продолжение процесса усреднения дает результаты, показанные в таблице 4, которая показывает взаимосвязь между крупными масштабами и полосами частот.Приблизительные частоты, используемые в нейрофизиологии, дельта (0–4 Гц), тета (4–7 Гц) и т. Д., Также показаны в таблице 4. Мы отмечаем, что сигналы, записанные в нашем исследовании, подвергались аппаратной полосовой фильтрации в диапазоне 0,1– Диапазон 100 Гц. Таким образом, полоса, обозначенная как высокая гамма, имеет сигналы в диапазоне 64–100 Гц, а дельта-полоса имеет сигналы в диапазоне 0,1–4 Гц.

Таблица 4 Процедура грубой зернистости математически идентична вейвлет-преобразованию Хаара. Для сигнала, собранного с частотой дискретизации 256 выборок в секунду, показаны полосы частот, содержащиеся в шкалах, вейвлет-аппроксимации и детали вейвлета.

Вейвлет-преобразования разлагают временной ряд аналогично процедуре грубой обработки, но также сохраняют детали, которые были удалены на каждом шаге. Аппроксимации вейвлета эквивалентны многомасштабным диапазонам, в то время как вейвлет , детали , содержат более высокие частоты, которые были удалены. Таким образом, многомасштабная процедура, введенная ²⁷, может быть идентично заменена вейвлет-преобразованием, если используются приближения. В качестве альтернативы, многомасштабные значения могут быть вычислены на деталях вейвлета, которые содержат частотные диапазоны, аналогичные традиционным полосам сигналов ЭЭГ.

Для этого исследования мы использовали более подходящее вейвлет-преобразование DB4 для получения деталей вейвлета, которые представляют собой полосы частот, равные степени двойки. Ближайшие традиционные метки (дельта, тета, альфа, бета, гамма и гамма-плюс) к деталям вейвлета показаны в таблице 4. В оставшейся части этого документа шесть неперекрывающихся частотных диапазонов используются для всего анализа и на рисунках используются традиционные обозначения частотных диапазонов. Исходный сигнал, обозначенный шкалой 1 в процедуре грубого зерна или вейвлетом уровня 0, был включен в наш ранний анализ, но алгоритмы ранжирования и выбора признаков никогда не выбирали исходный сигнал полного спектра для классификации.Таким образом, далее рассматриваются только детали вейвлета, показанные в таблице 4.

Необходимые пакеты программного обеспечения

Все вычисления, выполненные для этого исследования, были выполнены с использованием кода Python. Для всех необходимых расчетов использовались стандартные пакеты Python, включая numpy и scipy, а также другие общедоступные пакеты, перечисленные здесь:

eegtools (для чтения файлов edf): https://github.com/breuderink/eegtools

pywavelets (для разложения вейвлетов) : https: //pywavelets.readthedocs.io

pyrqa (расчеты RQA): https://pypi.python.org/pypi/PyRQA/

nolds (пример расчета энтропии и DFA): https://pypi.python.org/pypi/nolds

scikit -learn (ранжирование функций и машинное обучение): http://scikit-learn.github.io/stable

Если не указано иное, параметры по умолчанию использовались для всех вызовов функций, таких как выбор функций и вычисления машинного обучения.

Доступность данных ЭЭГ

Описанные выше методы могут применяться к любому набору данных ЭЭГ вместе с диагностическими метками.Конкретные данные участников, использованные в нашем исследовании, были специально разрешены для использования исследователями, связанными с лабораториями когнитивной неврологии в Бостонской детской больнице или лабораторией Тагера-Флусберга в Бостонском университете. По этой причине необработанные данные ЭЭГ не могут быть опубликованы.

Пути передачи сигнала Wnt

Органогенез. Апрель-июнь 2008 г .; 4 (2): 68–75.

¹ и ^1, ²

Юко Комия

¹ Кафедра биохимии; Университет медицины и стоматологии Нью-Джерси — Медицинская школа Роберта Вуда Джонсона

Раймонд Хабас

¹ Отделение биохимии; Университет медицины и стоматологии Нью-Джерси — Медицинская школа Роберта Вуда Джонсона

² Институт рака Нью-Джерси; Пискатауэй, Нью-Джерси, США

¹ Департамент биохимии; Университет медицины и стоматологии Нью-Джерси — Медицинская школа Роберта Вуда Джонсона

² Институт рака Нью-Джерси; Пискатауэй, Нью-Джерси, США

Автор, ответственный за переписку.Для корреспонденции: Раймонд Хабас; Исследовательская башня; Аудитория 629; Кафедра биохимии; Университет медицины и стоматологии Нью-Джерси; Медицинская школа Роберта Вуда Джонсона; 675 Hoes Lane; Пискатауэй, Нью-Джерси 08854 США; Тел .: 732.235.4543; Факс: 732.235.4783; Электронная почта: ude.jndmu@arsabah

Поступила 31 января 2008 г .; Принято 6 марта 2008 г.

Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Путь передачи сигналов Wnt — это древний и эволюционно консервативный путь, который регулирует важные аспекты детерминации клеточной судьбы, миграции клеток, полярности клеток, формирования нейрального паттерна и органогенеза во время эмбрионального развития.Wnts представляют собой секретируемые гликопротеины и составляют большое семейство из девятнадцати белков у людей, что указывает на устрашающую сложность регуляции передачи сигналов, функции и биологического выхода. На сегодняшний день идентифицированы основные сигнальные ветви, расположенные ниже рецептора Fz, включая канонический или Wnt / β-катенин-зависимый путь и неканонический или β-катенин-независимый путь, который можно далее разделить на Planar Cell Polarity и Wnt / Ca ²⁺ путей, и эти ветви активно препарируются на молекулярном и биохимическом уровнях.В этом обзоре мы суммируем самые последние достижения в нашем понимании этих путей передачи сигналов Wnt и роли этих путей в регуляции ключевых событий во время формирования эмбрионального паттерна и морфогенеза.

Ключевые слова: Wnt, вьющийся, взъерошенный, канонический, неканонический, β-катенин, плоская клеточная полярность

Введение

В современную эпоху молекулярной медицины много усилий было приложено для анализа сигнальных путей и молекулярные механизмы, контролирующие развитие организма.Эти усилия глубоко укоренились в современных исследователях и направлены исключительно на представление о том, что понимание механизмов, контролирующих нормальное развитие, может экспоненциально увеличить наши надежды на предотвращение и лечение плейотропных патологий, которые возникают, когда эти механизмы не работают. Одним из ключевых путей, для определения которого было приложено много усилий, является путь передачи сигнала Wnt.

Путь передачи сигналов Wnt является консервативным путем у многоклеточных животных. Название Wnt является результатом слияния названия гена полярности сегмента дрозофилы wingless и названия гомолога позвоночных, Integrated или int-1 .¹ Внеклеточный сигнал Wnt стимулирует несколько каскадов передачи внутриклеточного сигнала, включая канонический или зависимый от Wnt / β-катенин путь и неканонический или β-катенин-независимый путь, который можно разделить на плоскостную клеточную полярность. путь и путь Wnt / Ca ²⁺. ² Белки Wnt регулируют головокружительное множество клеточных процессов, включая определение клеточной судьбы, подвижность, полярность, формирование первичной оси и органогенез, и совсем недавно этот путь был вовлечен в обновление стволовых клеток.Поскольку сигнальные пути, которые играют решающую роль во время эмбриогенеза, жестко регулируются, экспрессия белков Wnt и антагонистов Wnt строго ограничена как во времени, так и в пространстве во время развития. ³ Нарушение регуляции передачи сигналов Wnt имеет катастрофические последствия для развивающегося эмбриона, и теперь хорошо известно, что дефектная передача сигналов Wnt является причинным фактором для ряда плейотропных патологий человека. В частности, эти патологии включают рак груди, толстой кишки и кожи, дефекты скелета и нарушения врожденных дефектов человека, включая наиболее частые роды с закрытием нервной трубки человека; расщелина позвоночника.⁴

Белки Wnt представляют собой секретируемые гликопротеины, которые связываются с N-концевым внеклеточным богатым цистеином доменом семейства рецепторов Frizzled (Fz), из которых у человека имеется десять Fz. ⁵ Белок Fz представляет собой белок с семью трансмембранными участками, топологически гомологичный рецепторам, связанным с G-белком. ⁶ Помимо взаимодействия между Wnt и Fz, корецепторы также необходимы для передачи сигналов Wnt. Например, родственный липопротеину низкой плотности белок 5/6 (LRP5 / 6) необходим для передачи канонического сигнала Wnt.⁵ Один ключевой уровень регуляции передачи сигналов Wnt происходит во внеклеточной среде с присутствием разнообразного числа секретируемых антагонистов Wnt. ⁷ После связывания Wnt с рецепторным комплексом сигнал преобразуется в цитоплазматический фосфопротеин Disheveled (Dsh / Dvl), и исследования показали, что Dsh может напрямую взаимодействовать с Fz. ⁸ На уровне Dsh сигнал Wnt разветвляется по крайней мере на три основных каскада, канонический, планарную клеточную полярность и Wnt / Ca ²⁺.Dsh является важным нижестоящим компонентом этого пути трансдукции и первым цитоплазматическим белком, который принимает участие во всех трех основных ветвях передачи сигналов Wnt. Однако до сих пор остается неясным, как белок Dsh регулирует и направляет передачу сигналов по каждому из этих путей. В этом обзоре мы сосредоточимся на последних достижениях в нашем понимании молекулярных компонентов этих основных сигнальных ветвей, различных уровней регуляции сигнализации и различных биологических результатов, которые достигаются.Поскольку был опубликован ряд отличных обзоров, мы будем направлять читателей к этим обзорам в соответствующих местах и поощрять читателей посетить страницу Wnt, которая является отличным источником обновленной информации по адресу: www.stanford.edu/∼rnusse/wntwindow.html .

Секреция Wnt и внеклеточные регуляторы

Лиганды Wnt представляют собой секретируемые гликопротеины, которые сильно модифицируются перед транспортировкой и высвобождением во внеклеточную среду. Исследования показали, что белки Wnt гликозилированы в эндоплазматическом ретикулуме, а также пальмитолированы.⁹ ^, ¹⁰ Было показано, что белок дикобраза играет важную роль в пальмитоляции белков Wnt, и их секреция регулируется белками wntless или , нарушенными равномерностью, и ретромерным комплексом. . ¹¹ ^— ¹⁴ Во внеклеточном матриксе белки Wnt могут связываться и стабилизироваться гепарансульфатными протеогликанами, включая Далли и глипикан 3, что дополнительно ограничивает их диффузию и модулирует их сигнальные способности.¹⁵ Во внеклеточном матриксе был идентифицирован ряд секретируемых белков, которые связываются с Wnts и предотвращают их взаимодействие либо с Fz, либо с LRP5 / 6, чтобы противодействовать передаче сигналов Wnt. К ним относятся белки Dickkopf (Dkk), ¹⁶ белок-ингибитор Wnt (WIF), ¹⁷ растворимые Frizzled-связанные белки (SFRP), ¹⁸ Cerebrus, ¹⁹ Frzb ²⁰ и контекстно-зависимый ингибитор Wnt Wise. . ²¹ Каждый из этих секретируемых ингибиторов жестко регулируется во время эмбриогенеза и служит для ограничения или, вероятно, создания градиента передачи сигналов Wnt для формирования паттерна.²² Интересным недавним открытием является идентификация факторов, включая Norrin ²³ и R-Spondin2, ²⁴, которые могут связываться с рецептором LRP5 / 6 и могут активировать передачу сигналов Wnt независимо от лиганда Wnt. Белок SOST также может связываться с LRP5 / 6, где он может противодействовать передаче сигналов Wnt. ²⁵

Канонический путь Wnt

Канонический путь был впервые идентифицирован и очерчен на генетическом скрининге у дрозофилы, а интенсивные исследования на мухах, червях, лягушках, рыбах и мышах привели к идентификации базовой молекулярной сигнальной структуры ( ).Отличительной чертой канонического пути Wnt является накопление и перемещение связанного с адгезивным соединением белка β-catenin в ядро. Без передачи сигналов Wnt цитоплазматический β-катенин расщепляется комплексом деструкции β-катенина, который включает Axin, аденоматозный полипоз coli (APC), протеинфосфатазу 2A (PP2A), киназу гликогенсинтазы 3 (GSK3) и казеинкиназу 1α (CK1α). . ⁵ ^, ²⁶ Фосфорилирование β-катенина в этом комплексе казеинкиназой и GSK3 нацелено на его убиквитинирование и последующее протеолитическое разрушение протеосомным механизмом.⁵ Связывание Wnt с его рецепторным комплексом, состоящим из Fz и LRP5 / 6, запускает серию событий, которые разрушают комплекс APC / Axin / GSK3, который необходим для целенаправленного разрушения β-катенина. ²⁶ Связывание Wnt с комплексом Fz / LRP5 / 6 индуцирует транслокацию через мембрану ключевого негативного регулятора передачи сигналов Axin, который связывается с консервативной последовательностью в цитоплазматическом хвосте LRP5 / 6. ²⁷ ^, ²⁸ Важно отметить, что стимуляция Wnt также регулирует стабильность Axin, поскольку при стимуляции Wnt было зарегистрировано дефосфорилирование Axin и снижение цитоплазматических уровней Axin.²⁹ ^— ³¹ Недавно было сообщено, что фактор сшивания микротрубочек с актином 1 (MACF1) может играть важную роль в этой мембранной транслокации Axin, хотя точный механизм остается неясным. ³² ^, ³³ При транслокации Axin через мембрану его связывание с LRP5 / 6 катализируется фосфорилированием LRP5 / 6, опосредованным либо CK1γ, либо GSK3. Важно понимать, что CK1 и GSK3, по-видимому, играют разные роли на двух уровнях канонической передачи сигналов; на уровне LRP5 / 6 их влияние положительно, тогда как на уровне β-катенина (см. ниже) их роль отрицательна.Предполагается, что связывание Axin устраняет негативную активность Axin в канонической передаче сигналов Wnt, так или иначе приводящую к активации фосфопротеина Dsh. Любопытно, что Dsh также связывается с Axin и Fz, и остается нерешенным вопрос о том, как Dsh активируется. ³⁴ ^— ³⁶ Dsh фосфорилируется рядом киназ, включая казеинкиназу 1, ³⁷ казеинкиназу 2, ³⁸ киназу, ассоциированную с метастазами, ³⁹ протеинкиназу C, ⁴⁰ и Par1.⁴¹ Вероятно, что это событие фосфорилирования регулирует как субклеточную локализацию Dsh, так и его способность взаимодействовать с эффекторами для многих ветвей передачи сигналов Wnt. ⁸ Dsh сам по себе является модульным белком, который содержит три отдельных домена, DIX, PDZ и домен DEP, а для канонической передачи сигналов домены DIX и PDZ, по-видимому, являются центральными для передачи сигналов. ⁸ Как только Dsh активируется, он подавляет активность фермента GSK3 и активирует сложную серию событий, которые приводят к предотвращению деградации β-катенина и его последующей стабилизации и накопления в цитоплазме.⁴² Стабилизированный β-катенин затем перемещается в ядро по механизму, который остается плохо изученным. Сам β-catenin не имеет последовательности ядерной локализации (NLS), и его вход в ядро, по-видимому, не требует функции белков importin или Ran-опосредованного ядерного импорта. ⁴³ Было высказано предположение, что β-catenin может, вероятно, «совмещаться» с другими факторами для транслокации в ядро, и одним из них может быть Axin, который, по-видимому, также подвергается ядерному перемещению.⁴⁴ ^, ⁴⁵ Для экспорта β-катенина исследования выявили два механизма этого процесса, отмечая также, что β-катенин не имеет ядерной экспортной последовательности (NES), во-первых, это участие Ran-связывающего белка3 (RanBP3) вместе с белком APC, который обладает NES, и другим, который является Ran-независимым, напрямую взаимодействующим с белками в комплексе ядерных пор. ⁴⁶ В ядре β-катенин оказывает влияние на транскрипцию гена, действуя как коактиватор транскрипции.Было обнаружено большое количество партнеров по связыванию β-catenin в ядре, и, возможно, лучше всего охарактеризованы члены LEF / TCF ДНК-связывающих факторов транскрипции. ⁴⁷ ^, ⁴⁸ Этот комплекс связывается с промотором генов-мишеней. Эти гены-мишени включают гены, необходимые для образования организатора во время эмбриогенеза, такие как Siamois и Twin , и гены, участвующие в онкогенезе, такие как Myc и CyclinD1 во время образования рака.⁴⁸ ^, ⁴⁹ Другие важные партнеры связывания β-катенина также включают Legless и Pygopus, которые влияют на удерживание в ядре и трансактивирующую способность β-катенина для регуляции транскрипции его генов-мишеней. ⁵⁰ ^— ⁵³

Схематическое изображение каскада преобразования канонического сигнала Wnt. Слева, в отсутствие лиганда Wnt, комплекс из Axin, APC, GSK3-β, CK1 и β-катенина находится в цитозоле.β-катенин дважды фосфорилируется CK1 и GSK3-β и целенаправленно разрушается протеосомным аппаратом, опосредованным β-TrCP. Справа, при стимуляции Wnt передача сигналов через рецептор Fz и корецепторный комплекс LRP5 / 6 индуцирует двойное фосфорилирование LRP6 с помощью CK1 и GSK3-β, что позволяет переносить белковый комплекс, содержащий аксин, из цитозоля на плазматическую мембрану. . Dsh также рекрутируется на мембрану и связывается с Fz, а Axin связывается с фосфорилированным LRP5 / 6. Этот комплекс, образованный на мембране при Fz / LRP5 / 6, индуцирует стабилизацию β-cat посредством секвестрации и / или деградации Axin.β-катенин перемещается в ядро, где он объединяется с членами семейства Lef / Tcf, опосредуя индукцию транскрипции генов-мишеней.

Каноническая передача сигналов Wnt играет ключевую роль в принятии решений о клеточных судьбах во время раннего эмбриогенеза, и, возможно, лучшей моделью организма, где это было элегантно разработано, является система Xenopus. ⁴⁹ После оплодотворения процесс коркового вращения перемещает дорсализационный фактор на будущую дорсальную сторону эмбриона, чтобы установить формирование сигнального центра, называемого Организатором Спеманна-Мангольда.Исследования показали, что вращение коры перемещает белок Dsh и другие компоненты пути Wnt, что приводит к стабилизации β-катенина в будущей дорсальной стороне раннего эмбриона Xenopus и является критическим событием в формировании дорсального организатора Спеманна-Мангольда. . Неясно, отвечает ли лиганд Wnt за создание дорсального организатора или каскад передачи сигналов Wnt активируется внутриклеточно без необходимости в лиганде. ⁵⁴ Однако недавнее исследование продемонстрировало, что Wnt11 действительно является лигандом Wnt, ответственным за это действие в раннем формировании дорсальной оси.⁵⁵ У эмбрионов Xenopus микроинъекция РНК, которая активирует каноническую передачу сигналов Wnt, может индуцировать образование эктопических дорсальных осевых структур при вентральной инъекции. Например, сверхэкспрессия Xwnt8, Dsh, β-catenin или доминантно-отрицательного GSK3 может индуцировать образование вторичной оси. ⁵⁶ Кроме того, на раннем этапе развития Xenopus комплекс β-catenin / TCF способствует транскрипции Twin и Siamois , которые кодируют факторы транскрипции гомеодомена.Белки Twin и Siamois имеют решающее значение для экспрессии генов, специфичных для организаторов. ⁵⁷ ^, ⁵⁸ Эти данные вместе подтверждают идею, что канонический путь необходим для формирования дорсальной оси во время раннего развития.

После образования Spemann-Mangold Organizer канонический путь Wnt также регулирует формирование передней головки и формирование нейронного паттерна. Во время гаструляции ряд ингибиторов Wnt, включая Cerberus, WIF, Dickkopf и Frzb, экспрессируются и секретируются организатором, чтобы модулировать формирование передней части эмбриона, а также способствовать формированию передней головки.²² Эти ингибирующие белки могут физически связывать Wnt и блокировать образование комплекса Wnt / Fz, что приводит к низким уровням ядерного белка β-катенина в передней области и более высокому уровню в задней области эмбриона гаструлы. Градиент сигнала Wnt вдоль переднезадней оси важен для формирования передней структуры головы и нейроэктодермального постукивания. ³ Каноническая передача сигналов Wnt также контролирует последующее формирование заднего паттерна и формирование хвоста, а также формирование различных систем органов, включая сердце, легкие, почки, кожу и кости.³ ^, ⁴ ^, ⁴⁷ ^, ⁴⁸ ^, ⁵⁶ Передача сигналов Wnt также недавно была показана, чтобы играть важную роль в обновлении стволовых клеток. ⁴⁸ По-видимому, не существует системы органов, образование которой канонический путь Wnt прямо или косвенно не регулирует во время эмбриогенеза. Уже один этот факт подчеркивает важность и решающую функцию канонического пути Wnt.

Неканонический путь планарной полярности клеток

Неканонический путь часто называют β-катенин-независимым путем, и этот путь можно далее разделить на две отдельные ветви: путь планарной полярности клеток или путь PCP ( ) и пути Wnt / Ca ²⁺ ().Путь PCP возник в результате генетических исследований на Drosophila, в которых было обнаружено, что мутации в компонентах передачи сигналов Wnt, включая Frizzled и Disheveled, рандомизируют ориентацию эпителиальных структур, включая волосы на кутикуле и сенсорные щетинки. ⁵⁹ Клетки в эпителии, как известно, обладают определенной апикально-базолатеральной полярностью, но, кроме того, они также поляризованы вдоль плоскости эпителиального слоя. Эта жесткая организация определяет ориентацию структур, включая ориентацию волосяных фолликулов, сенсорных щетинок и шестиугольного ряда омматидиев в глазу.⁶⁰ У позвоночных эта организация, как было показано, лежит в основе организации и ориентации стереоцилий в сенсорном эпителии внутреннего уха, организации волосяных фолликулов, а также морфологии и миграционного поведения дорсальных мезодермальных клеток, подвергающихся гаструляции. ⁶¹ Определяющей особенностью этого пути является его регуляция актинового цитоскелета для такой поляризованной организации структур и направленной миграции. Более того, этот путь, по-видимому, функционирует независимо от транскрипции.

Схематическое изображение каскада трансдукции Planar Cell Polarity. Передача сигналов Wnt передается через Fz независимо от LRP5 / 6, что приводит к активации Dsh. Dsh через Daam1 опосредует активацию Rho, который, в свою очередь, активирует Rho-киназу (ROCK). Daam1 также опосредует полимеризацию актина через актин-связывающий белок Profilin. Dsh также опосредует активацию Rac, который, в свою очередь, активирует JNK. Передача сигналов от Rock, JNK и Profilin интегрируется для изменений цитоскелета, связанных с поляризацией и подвижностью клеток во время гаструляции.

Схематическое изображение каскада передачи сигнала Wnt / Ca ²⁺. Передача сигналов Wnt через Fz опосредует активацию Dsh через активацию G-белков. Растрепанный активирует фосфодиэстеразу PDE, которая ингибирует PKG и, в свою очередь, ингибирует высвобождение Ca ²⁺. Dsh через PLC активирует IP3, что приводит к высвобождению внутриклеточного Ca ²⁺, который, в свою очередь, активирует CamK11 и кальциневрин. Кальциневрин активирует NF-AT для регулирования судьбы вентральных клеток. CamK11 активирует TAK и NLK, которые ингибируют функцию β-catenin / TCF, чтобы негативно регулировать формирование дорсальной оси.DAG через PKC активирует CDC42, чтобы опосредовать разделение тканей и движения клеток во время гаструляции.

Недавние исследования показали, что неканонический путь скорее всего эквивалентен пути Planar Cell Polarity у Drosophila, потому что основные компоненты путей, по-видимому, совпадают. ⁶⁰ Неканонический путь, хотя в ряде исследований было обнаружено, что он регулирует конвергентные движения разгибания во время гаструляции рыбок данио и Xenopus. ⁶² Во время гаструляции позвоночных мезодермальные и эктодермальные клетки подвергаются конвергентному расширению.В этом процессе поляризованные клетки интеркалируют вдоль медиолатеральной оси, что приводит к медиолатеральному сужению (конвергентному) и переднезаднему удлинению (расширению). ⁶³ Неканонический путь Wnt, как было показано, регулирует как клеточную полярность, так и движения дорсальных мезодермальных клеток во время конвергентного расширения и позже во время закрытия нервной трубки. ⁶⁴ Лиганды Wnt4, Wnt5a и Wnt11, как было установлено, передают сигналы посредством неканонического пути, хотя недавно было показано, что Wnt11 играет решающую роль в формировании ранних осей посредством канонического пути.⁵⁵ Избыточная экспрессия этих Wnts нарушает конвергентное удлинение как у Xenopus, так и у рыбок данио, не влияя драматически на детерминацию клеточной судьбы, регулируемую каноническим путем. Было показано, что многие другие компоненты неканонического пути также нарушают конвергентное расширение, включая Dsh, Fz, Daam1, Rho, Rac, Prickle и Strabismus. ⁶⁵ ^— ⁷⁴ Было показано, что другие факторы, такие как PKA, действуют как негативный регулятор неканонической передачи сигналов.PKA может взаимодействовать с RhoA и ингибировать активность Rho, а также PKA не влияет на транскрипцию зависимого от β-катенина гена. ⁷⁵

Считается, что в неканоническом пути сигнал Wnt опосредуется через Fz независимо от корецептора LRP5 / 6. ⁵ Однако недавнее исследование показало, что LRP6 может регулировать конвергентные движения вытягивания ⁷⁶, и для решения этого вопроса потребуются дополнительные исследования. Важно отметить, что до сих пор у Drosophila неясно, регулирует ли молекула Wnt этот путь.⁵⁹ Корецепторы Fz для неканонического пути четко не определены, хотя есть предполагаемые кандидаты, включая NRh2, ⁷⁷ Ryk, ⁷⁸ PTK7 ⁷⁹ и ROR2. ⁸⁰ Затем сигнал преобразуется в Dsh, что приводит к его активации. Оба домена PDZ и DEP Dsh используются для активации двух параллельных путей, которые активируют малые GTPases Rho и Rac. ⁸ Для активации ветви передачи сигналов Rho передача сигналов Wnt индуцирует комплекс Dsh-Daam1, который приводит к активации Daam1 и, следовательно, к активации Rho GTPase посредством по крайней мере одного фактора обмена Rho-гуанина, идентифицированного до сих пор, WGEF.⁶⁷ ^, ⁸¹ Daam1 (растрепанный активатор морфогенеза 1) представляет собой гомологичный с формином белок, который может связываться с Dsh и RhoA, что указывает на возможность наличия петли положительной обратной связи для передачи сигналов. ⁶⁷ Активация Rho-GTPase приводит к активации Rho-ассоциированной киназы (ROCK) ⁸² и миозина, ⁸³, что приводит к модификации актинового цитоскелета и перестройке цитоскелета. Вторая ветвь передачи сигналов требует DEP-домена Dsh и активирует Rac GTPase.Эта активация не зависит от Daam1, а активированный Rac, в свою очередь, стимулирует активность JNK. ⁶⁶ ^, ⁸⁴ Факторы, расположенные ниже по потоку от JNK для неканонической передачи сигналов, остаются плохо разрешенными. Хотя и Rho, и Rac участвуют в регуляции транскрипции, на сегодняшний день неясно, транскрибируются ли какие-либо гены ниже этих двух GTPases для неканонической передачи сигналов. Преобладает догма, что их основная роль действительно исключительно в модуляции цитоскелета.⁶³ Следует отметить, что то, как активности Rho и Rac, которые, как полагают, имеют противоположные функции, координируются для клеточной поляризации и направленной миграции, остается плохо определенным.

Хотя многочисленные эксперименты подтвердили, что неканоническая передача сигналов играет важную роль в движении конвергентного расширения, то, как именно этот путь регулирует этот процесс, остается неясным. В пути PCP у Drosophila данные показали ключевую роль в дифференциальной локализации ключевых компонентов, включая Fz, Flamingo (Fmi), Dsh, косоглазие и Prickle, которые опосредуют поляризацию.⁵⁹ Однако у позвоночных дифференциальную локализацию по-прежнему трудно выявить из-за отсутствия качественных реагентов для исследования этого вопроса. В дорсальных мигрирующих мезодермальных клетках дифференциальная локализация Dsh, Rac и PKCδ наблюдалась вдоль медиального и латерального краев мигрирующих клеток у Xenopus, но Prickle, по-видимому, локализуется спереди (в клетках рыбок данио). ⁶² ^, ⁸⁵ Субклеточная локализация Dsh остается одной из наиболее проанализированных.В клетках, подвергающихся конвергентному удлинению, Dsh локализуется на плазматической мембране и накапливается в ламеллиподиях. ⁸⁶ В других клетках Dsh располагается в цитоплазме и, возможно, в ядре, где он может регулировать каноническую передачу сигналов Wnt. ² ^, ⁸⁷ Избыточная экспрессия или подавление Dsh нарушает локализацию мембраны и медиолатеральную клеточную полярность. Т.о., асимметричное и мембранное накопление белка Dsh и активация пути PCP, по-видимому, необходимы для конвергентного удлинения.⁸⁸ Следует также отметить, что остается неясным, играет ли неканонический путь Wnt инструктивную или разрешающую роль для движений гаструляции. Доказательства на рыбках данио продемонстрировали, что инъекции РНК Wnt11 в эмбрион на двухклеточной стадии было достаточно для устранения дефектов гаструляции, наблюдаемых у мутанта silberblick , указывая на то, что локализованная экспрессия Wnt11 не требуется и, следовательно, его роль является разрешающей. ⁸⁹ Дальнейшие исследования, несомненно, дадут ответы на этот важный вопрос в будущем.

Неканонический путь Wnt / Ca

²⁺
Вторая ветвь неканонического пути передачи сигналов Wnt называется путем Wnt / Ca ²⁺, и хотя этот путь разделяет ряд компонентов планарного пути. Путь клеточной полярности, описанный ранее, имеет четкие различия, которые позволяют выделить его в отдельную ветвь (). Этот путь дополнительно модулирует каноническую передачу сигналов для формирования дорсальной оси и передачу сигналов Planar Cell Polarity для движений гаструляционных клеток.Путь Wnt / Ca ²⁺ появился после открытия, что некоторые рецепторы Wnts и Fz могут стимулировать внутриклеточное высвобождение Ca ²⁺ из ER, и этот путь зависит от G-белков. ⁹⁰ ^, ⁹¹ Ca ²⁺ волны в эмбрионе были дополнительно продемонстрированы в областях эмбрионов рыбок данио ⁹² и Xenopus ⁹³, подвергающихся гаструляции, где, как считается, они играют решающую роль в формировании раннего паттерна. . Wnt5a, Wnt11 и крысиный Fz2 (RFz-2) способны к внутриклеточному высвобождению Ca ²⁺, не влияя на стабилизацию β-катенина.⁹¹ Высвобождение кальция за счет сверхэкспрессии Wnt5a или RFz-2 в эмбрионах рыбок данио ингибируется токсином коклюша и субъединицей трансдуцина, которые ингибируют передачу сигналов G-белка. ⁹⁴ ^, ⁹⁵ Эти сообщения показывают, что передача сигналов Wnt / Fz приводит к высвобождению внутриклеточного Ca ²⁺ через тримерные G-белки. Высвобождение кальция и внутриклеточное накопление активируют несколько чувствительных к Ca ²⁺ белков, включая протеинкиназу C (PKC) ⁹⁶ и кальций / кальмодулин-зависимую киназу II (CamKII).⁹⁷ CamK11, как было показано, активирует фактор транскрипции NFAT, чтобы способствовать судьбе вентральных клеток у эмбриона Xenopus. ⁹⁸ Было также показано, что CamK11 активирует киназу, активированную TGFβ (TAK1) и немо-подобную киназу (NLK), которая может противодействовать передаче сигналов β-катенина / TCF. ⁹⁹ Ca ²⁺ также может активировать PKC, который регулирует процесс разделения тканей во время гаструляции посредством активации малой GTPase CDC42. ¹⁰⁰
Роль пути Wnt / Ca ²⁺ во время эмбриогенеза разнообразна и включает негативную регуляцию формирования дорсальной оси, стимулирование судьбы вентральных клеток, регуляцию разделения тканей и конвергентных движений разгибания во время гаструляции и позже. в формировании сердца.У эмбрионов Xenopus волны кальция и высвобождение были зарегистрированы в клетках, претерпевающих конвергентное расширение, и нарушение высвобождения кальция фармакологическими агентами блокирует конвергентные движения вытяжения. ⁹⁰ ^, ⁹¹ Лиганды Wnt5a и Wnt11 могут индуцировать высвобождение Ca ²⁺ и активировать PKC и CamKII. Ингибирование конвергентных движений разгибания, индуцированных неправильной экспрессией Wnt5a, может быть частично устранено экспрессией CamKII в эмбрионах рыбок данио.¹⁰¹ Кроме того, сверхэкспрессия самого CamKII может ингибировать движения гаструляции у эмбрионов Xenopus. ⁹⁷ Белок Dsh через домены PDZ и DEP может также индуцировать высвобождение Ca ²⁺ и активацию PKC и CamK11, чтобы регулировать формирование сердца, что позволяет предположить, что он является важным компонентом Wnt / Ca ²⁺ путь. ⁹⁶ Вместе эти исследования показывают, что путь Wnt / Ca ²⁺ функционирует как критический модулятор как канонического, так и плоского путей клеточной полярности.В будущем будет важно понять, как этот путь функционирует на молекулярном уровне, чтобы регулировать различные биологические результаты этих двух путей.
Другие пути передачи сигналов Wnt
В то время как канонические пути Planar Cell Polarity и Wnt / Ca ²⁺ остаются наиболее изученными ветвями на сегодняшний день, появился ряд других путей. Эти пути могут иметь общие перекрывающиеся компоненты ветвей Planar Cell Polarity и Wnt / Ca ²⁺, но, по-видимому, имеют разные результаты.Таким образом, их связь с этими ветвями в настоящее время остается неясной, но мы кратко опишем, что известно об этих путях. Во время миграции нейронов и синаптогенеза передача сигналов Wnt, как было показано, регулирует цитоскелет микротрубочек, и этот путь зависит от активности GSK3 и Dsh. ¹⁰² ^, ¹⁰³ Во время наведения аксонов другой путь Wnt через рецептор Ryk и протоонкопротеин Src регулирует отталкивание нейронов. ¹⁰⁴ ^, ¹⁰⁵ Во время гаструляции передача сигналов Wnt посредством казеинкиназы ингибирует Rap1-GTPase, что приводит к модуляции цитоскелета.¹⁰⁶ ^, ¹⁰⁷ Для роста клеток передача сигналов Wnt через Dsh и GSK3 регулирует опухолевый супрессор TSC2, негативно регулируя mTor. ¹⁰⁸ ^, ¹⁰⁹ Для полярности эпителия и миграции клеток передача сигналов Wnt через Dsh, aPKC, Par3, Par6 и LG1 модулирует полярность клеток и цитоскелет микротрубочек. ¹¹⁰ Во время миогенеза передача сигналов Wnt через PKA и фактор транскрипции CREB модулирует транскрипцию генов, специфичных для мышц, включая MyoD и Myf5.¹¹¹ Во время гаструляции передача сигналов Wnt через рецептор ROR2 модулирует экспрессию протокадгерина PAPC через пути CDC42 и JNK. ¹¹² Вместе эти возникающие пути намекают на сложность, с помощью которой передача сигналов Wnt может оказывать влияние на ряд развивающихся клеточных систем, и исследования, чтобы понять, как эти пути интегрированы, остаются критическими.
Специфичность сигнала
Большое количество лигандов Wnt у позвоночных вместе со многими ветвями передачи сигналов, которые запускаются лигандами Wnt, привели к вопросу о том, может ли конкретный лиганд Wnt избирательно активировать одну конкретную ветвь передачи сигналов.Однако ответ на этот вопрос остается нерешенным, поскольку некоторые лиганды Wnt могут активировать как канонические, так и неканонические пути. ⁷ ^, ⁶⁴ ^, ¹¹³ Например, Wnt8 может приводить к накоплению ядерного β-катенина, но он не активирует передачу сигналов Wnt / Ca ²⁺, а Wnt11 пока может активировать как канонические и неканоническая сигнализация. ⁵⁵ Сходным образом Wnt5a может активировать неканонический путь и индуцировать приток кальция, но не активировать стабилизацию β-катенина.⁹¹ ^, ¹¹⁴ Точно так же рецепторы Frizzled , по-видимому, активируют как канонические, так и неканонические пути, что исключает прямую классификацию этих белков либо на специфические активаторы, либо на каноническую или неканоническую передачу сигналов. ⁴ ^, ⁶ ^, ⁷ Однако следует отметить, что некоторые исследования сообщили, что некоторые рецепторы Fz могут иметь предпочтение для ветви передачи сигналов Wnt / Ca ²⁺.Неправильная экспрессия крысиного frizzled-1 (RFz-1) в эмбрионах рыбок данио не увеличивала высвобождение Ca ²⁺ и активацию PKC и CamKII. С другой стороны, RFz-2 стимулирует активность CamKII и индуцирует транслокацию PKC. ⁶ ^, ¹¹⁵ Таким образом, до сих пор неясно, как разные лиганды Wnt или рецепторы Frizzled способны активировать специфический путь активации. Современная догма, по-видимому, состоит в том, что специфичность конкретного пути не может быть продиктована конкретной комбинацией лиганд / рецептор как таковой.Разумно предположить, и несколько исследований показали, что корецепторы, партнеры по связыванию Dsh и / или субклеточная локализация Dsh, вероятно, являются важными факторами, которые могут определять специфичность сигнала. ⁵ ^, ⁸ Например, LRP-5 и LRP-6 участвуют только в каноническом пути, ⁵ ^, ⁸, в то время как NRh2, PTK7 и ROR2 выборочно передают неканонический путь. ⁸ ^, ¹¹³
Белок Dsh является первым внутриклеточным компонентом, который связывается с Fz и действует во всех ветвях передачи сигналов.Белок Dsh, как упоминалось ранее, имеет три консервативных домена: DIX, PDZ и DEP домены ^{, 116,}, и, по-видимому, эти специфические домены используются для передачи сигналов, специфичных для пути. ⁸ Домен DIX Dsh связывается с Axin, который является компонентом комплекса разрушения β-catenin, и ингибирует образование комплекса, а домен DIX важен для канонического пути, но не требуется для неканонического пути. Домен PDZ Dsh функционирует в каноническом, неканоническом пути и пути Wnt / Ca ²⁺, в то время как домен DEP функционирует в неканонической передаче сигналов.⁸ ^, ³⁵ Домен DEP также необходим для мембранной транслокации Dsh. ¹¹⁷ Помимо использования отдельных доменов, конкретный путь, который активирует Dsh, зависит от его партнеров по связыванию. Сложность этой передачи сигналов можно увидеть на примере примерно тридцати партнеров по связыванию, идентифицированных на сегодняшний день, и мы можем ожидать, что в будущем будет добавляться больше. ⁸ Компоненты неканонической передачи сигналов, такие как Daam1, Strabismus и Prickle, могут связываться с доменом PDZ Dsh и функционировать в пути PCP.⁸ И наоборот, Dsh, который связывается с CK1, GSK3 и GBP, функционирует в канонической передаче сигналов. ⁵ ^, ⁷
Субклеточная локализация Dsh также важна для специфичности передачи сигналов. Как упоминалось выше, асимметричное накопление Dsh в мембранах важно для неканонических путей и конвергентных движений разгибания. ¹¹⁸ ^— ¹²⁰ Удаление Dsh из мембраны ингибирует активацию Rho, что приводит к нарушению конвергентного удлинения, но не нарушает каноническую передачу сигналов.⁸⁸ Хотя недавние исследования показали, что Dsh перемещается между цитоплазмой и ядром, важность функции Dsh в ядре остается неясной. ² ^, ⁸⁷
Заключение
Недавние доказательства на сегодняшний день сильно подтверждают тот факт, что передача сигналов Wnt играет критическую роль в формировании паттернов во время эмбриогенеза. Многие исследования за последние два десятилетия идентифицировали многочисленные сигнальные компоненты, которые помогли построить молекулярную основу для многих ветвей пути передачи сигналов Wnt.Однако разнообразная функция, интеграция и специфичность передачи сигналов Wnt все еще остаются неясными. Более того, нам не хватает четкого понимания многих биохимических аспектов в рамках этой сигнальной структуры. Недавние исследования продемонстрировали сильную корреляцию, а иногда и причинную связь между нарушением регуляции передачи сигналов Wnt и заболеваниями человека. Таким образом, изучение передачи сигналов Wnt остается важной целью для двойного понимания как основного механизма эмбрионального развития, так и болезней человека.Несомненно, в будущем предстоит много важных прорывных исследований в области передачи сигналов Wnt, которые будут способствовать нашему пониманию этого важного пути, и все мы с нетерпением ждем этих открытий.
Благодарности
Мы благодарны членам лаборатории Habas за обсуждения и критические комментарии, а R.H. поддерживается грантами Американской кардиологической ассоциации, March of Dimes, Национального научного фонда и Национальных институтов здравоохранения.
Список литературы
1.Wodarz A, Nusse R. Механизмы передачи сигналов Wnt в развитии. Annu Rev Cell Dev Biol. 1998. 14: 59–88. [PubMed] [Google Scholar] 3. Ямагути Т.П. Голова или хвост: Wnts и передне-задний узор. Curr Biol. 2001; 11: 713–724. [PubMed] [Google Scholar] 4. Логан С.Ю., Нусс Р. Путь передачи сигналов Wnt в развитии и болезнях. Annu Rev Cell Dev Biol. 2004 [PubMed] [Google Scholar] 5. He X, Семенов М., Tamai K, Zeng X. Белки 5 и 6, связанные с рецептором ЛПНП, в передаче сигналов Wnt / бета-катенин: стрелки указывают путь.Разработка. 2004. 131: 1663–1677. [PubMed] [Google Scholar] 6. Schulte G, Bryja V. Семейство Frizzled нетрадиционных рецепторов, связанных с G-белком. Trends Pharmacol Sci. 2007. 28: 518–525. [PubMed] [Google Scholar] 7. Кадиган К.М., Лю Ю.И. Сигнализация Wnt: сложность на поверхности. J Cell Sci. 2006; 119: 395–402. [PubMed] [Google Scholar] 8. Уоллингфорд Дж. Б., Хабас Р. Биология развития Disheveled: загадочный белок, управляющий клеточной судьбой и клеточной полярностью. Разработка. 2005. 132: 4421–4436. [PubMed] [Google Scholar] 9.Смолич Б.Д., МакМахон Дж.А., МакМахон А.П., Папкофф Дж. Белки семейства Wnt секретируются и связываются с поверхностью клетки. Mol Biol Cell. 1993; 4: 1267–1275. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Willert K, Brown JD, Danenberg E, Duncan AW, Weissman IL, Reya T., Yates JR, 3rd, Nusse R. Белки Wnt модифицированы липидами и могут действовать как факторы роста стволовых клеток. Природа. 2003. 423: 448–452. [PubMed] [Google Scholar] 11. Banziger C, Soldini D, Schutt C, Zipperlen P, Hausmann G, Basler K. Wntless, консервативный мембранный белок, предназначенный для секреции белков Wnt из сигнальных клеток.Клетка. 2006; 125: 509–522. [PubMed] [Google Scholar] 12. Bartscherer K, Pelte N, Ingelfinger D, Boutros M. Секреция лигандов Wnt требует Evi, консервативного трансмембранного белка. Клетка. 2006; 125: 523–533. [PubMed] [Google Scholar] 13. Hausmann G, Banziger C, Basler K. Помощь Wingless в полете: как секретируются белки WNT. Nat Rev Mol Cell Biol. 2007. 8: 331–336. [PubMed] [Google Scholar] 14. Хофманн К. Суперсемейство мембраносвязанных O-ацилтрансфераз, влияющих на передачу сигналов wnt. Trends Biochem Sci.2000. 25: 111–112. [PubMed] [Google Scholar] 15. Lin X. Функции гепарансульфатных протеогликанов в передаче сигналов в клетках во время развития. Разработка. 2004. 131: 6009–6021. [PubMed] [Google Scholar] 16. Glinka A, Wu W., Delius H, Monaghan AP, Blumenstock C, Niehrs C. Dickkopf-1 является членом нового семейства секретируемых белков и выполняет функцию индукции головы. Природа. 1998. 391: 357–362. [PubMed] [Google Scholar] 17. Се Дж.К., Коджабачян Л., Ребберт М.Л., Раттнер А., Смоллвуд П.М., Самос С.К., Нусс Р., Давид И.Б., Натанс Дж.Новый секретируемый белок, который связывается с белками Wnt и подавляет их активность. Природа. 1999; 398: 431–436. [PubMed] [Google Scholar] 18. Хоанг Б.Х., Томас Дж.Т., Абдул-Карим Ф.В., Коррейя К.М., Конлон Р.А., Луйтен Ф.П., Баллок РТ. Паттерн экспрессии двух родственных Frizzled генов, Frzb-1 и Sfrp-1, во время эмбриогенеза мышей предполагает роль в модулировании действия членов семейства Wnt. Dev Dyn. 1998. 212: 364–372. [PubMed] [Google Scholar] 19. Bouwmeester T, Kim S, Sasai Y, Lu B, De Robertis EM. Цербер — индуцирующий голову секретируемый фактор, экспрессирующийся в передней энтодерме организатора Спеманна.Природа. 1996; 382: 595–601. [PubMed] [Google Scholar] 20. Wang S, Krinks M, Lin K, Luyten FP, Moos M., Jr Frzb, секретируемый белок, экспрессируемый в организаторе Spemann, связывает и ингибирует Wnt-8. Клетка. 1997. 88: 757–766. [PubMed] [Google Scholar] 21. Итасаки Н., Джонс С.М., Меркурио С., Роу А., Домингос П.М., Смит Дж. К., Крумлауф Р. Уайз, контекстно-зависимый активатор и ингибитор передачи сигналов Wnt. Разработка. 2003. 130: 4295–4305. [PubMed] [Google Scholar] 22. Кавано Ю., Кипта Р. Секретные антагонисты сигнального пути Wnt.J Cell Sci. 2003; 116: 2627–2634. [PubMed] [Google Scholar] 23. Xu Q, Wang Y, Dabdoub A, Smallwood PM, Williams J, Woods C, Kelley MW, Jiang L, Tasman W, Zhang K, Nathans J. Развитие сосудов в сетчатке и внутреннем ухе: контроль Норрином и Frizzled-4, пара лиганд-рецептор с высоким сродством. Клетка. 2004. 116: 883–895. [PubMed] [Google Scholar] 24. Kazanskaya O, Glinka A, del Barco Barrantes I, Stannek P, Niehrs C., Wu W. R-Spondin2 является секретируемым активатором передачи сигналов Wnt / бета-катенина и необходим для миогенеза Xenopus.Dev Cell. 2004. 7: 525–534. [PubMed] [Google Scholar] 25. Семенов М., Тамай К., He X. SOST является лигандом для LRP5 / LRP6 и ингибитором передачи сигналов Wnt. J Biol Chem. 2005; 280: 26770–26775. [PubMed] [Google Scholar] 26. Гордон MD, Нусс Р. Передача сигналов Wnt: множественные пути, множественные рецепторы и множественные факторы транскрипции. J Biol Chem. 2006; 281: 22429–22433. [PubMed] [Google Scholar] 27. Mao J, Wang J, Liu B, Pan W, Farr GH, 3rd, Flynn C, Yuan H, Takada S, Kimelman D, Li L, Wu D. Белок-5, связанный с рецептором липопротеинов низкой плотности, связывается с Axin и регулирует канонический путь передачи сигналов Wnt.Mol Cell. 2001; 7: 801–809. [PubMed] [Google Scholar] 28. Zeng X, Huang H, Tamai K, Zhang X, Harada Y, Yokota C, Almeida K, Wang J, Doble B, Woodgett J, Wynshaw-Boris A, Hsieh JC, He X. Инициирование передачи сигналов Wnt: контроль корецептора Wnt Фосфорилирование / активация Lrp6 посредством функций кудрявого, растрепанного и аксина. Разработка. 2008. 135: 367–375. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 29. Tolwinski NS, Wehrli M, Rives A, Erdeniz N, DiNardo S, Wieschaus E. Сигнал Wg / Wnt может передаваться через arrow / LRP5,6 и Axin независимо от активности Zw3 / Gsk3beta.Dev Cell. 2003. 4: 407–418. [PubMed] [Google Scholar] 30. Willert K, Logan CY, Arora A, Fish M, Nusse R. Гомолог Drosophila Axin, Daxin, ингибирует передачу сигналов Wnt. Разработка. 1999; 126: 4165–4173. [PubMed] [Google Scholar] 31. Ямамото Х., Кишида С., Кишида М., Икеда С., Такада С., Кикучи А. Фосфорилирование аксина, негативного регулятора сигнала Wnt, с помощью киназы-3бета гликогенсинтазы регулирует его стабильность. J Biol Chem. 1999; 274: 10681–10684. [PubMed] [Google Scholar] 32. Chen HJ, Lin CM, Lin CS, Perez-Olle R, Leung CL, Liem RK.Роль фактора 1 перекрестного связывания микротрубочек с актином (MACF1) в сигнальном пути Wnt. Genes Dev. 2006; 20: 1933–1945. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Хабас Р. Каноническая сигнализация Wnt: неожиданный новый игрок. Dev Cell. 2006. 11: 138–139. [PubMed] [Google Scholar] 34. Кишида С., Ямамото Н., Хино С., Икеда С., Кишида М., Кикучи А. Домены DIX Dvl и аксина необходимы для белковых взаимодействий и их способности регулировать стабильность бета-катенина. Mol Cell Biol. 1999; 19: 4414–4422.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 35. Wharton KA., Мл. Работает с Dvl: белками, которые связываются с Dsh / Dvl, и их значение для передачи сигнала Wnt. Dev Biol. 2003; 253: 1–17. [PubMed] [Google Scholar] 36. Wong HC, Bourdelas A, Krauss A, Lee HJ, Shao Y, Wu D, Mlodzik M, Shi DL, Zheng J. Прямое связывание домена PDZ Disheveled с консервативной внутренней последовательностью в C-концевой области Frizzled. Mol Cell. 2003; 12: 1251–1260. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 37.Питерс Дж. М., Маккей Р. М., Маккей Дж. П., Графф Дж. М.. Казеинкиназа I трансдуцирует сигналы Wnt. Природа. 1999; 401: 345–350. [PubMed] [Google Scholar] 38. Willert K, Brink M, Wodarz A, Varmus H, Nusse R. Казеиновая киназа 2 связывается и фосфорилирует растрепанные. EMBO J. 1997; 16: 3089–3096. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 39. Кибардин А, Осипова О, Сокол С.Ю. Киназа, связанная с метастазами, модулирует передачу сигналов Wnt, чтобы регулировать формирование паттерна мозга и морфогенез. Разработка. 2006; 133: 2845–2854. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 40.Чен В., тен Берге Д., Браун Дж., Ан С., Ху Л.А., Миллер В.Е., Карон М.Г., Барак Л.С., Нусс Р., Лефковиц Р.Дж. Disheveled 2 привлекает бета-аррестин 2 для опосредования Wnt5A-стимулированного эндоцитоза Frizzled 4. Наука. 2003. 301: 1391–1394. [PubMed] [Google Scholar] 41. Осипова О, Дхаван С, Сокол С, Грин Дж.Б. Определенные белки PAR-1 функционируют в разных ветвях передачи сигналов Wnt во время развития позвоночных. Dev Cell. 2005; 8: 829–841. [PubMed] [Google Scholar] 42. Hatsell S, Rowlands T, Hiremath M, Cowin P. Бета-катенин и Tcfs в развитии и раке молочной железы.J Mammary Gland Biol Neoplasia. 2003. 8: 145–158. [PubMed] [Google Scholar] 43. Фаготто Ф, Глюк У, Гумбинер БМ. Независимый от сигнала ядерной локализации и независимый от импорта / кариоферина ядерный импорт бета-катенина. Curr Biol. 1998. 8: 181–190. [PubMed] [Google Scholar] 44. Cong F, Varmus H. Ядерно-цитоплазматическое перемещение аксина регулирует субклеточную локализацию бета-катенина. Proc Natl Acad Sci USA. 2004. 101: 2882–2887. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 45. Шварц-Ромонд Т., Меткалф С., Бьенц М.Динамическое рекрутирование аксина сборками Disheveled белков. J Cell Sci. 2007. 120: 2402–2412. [PubMed] [Google Scholar] 46. Hendriksen J, Fagotto F, van der Velde H, van Schie M, Noordermeer J, Fornerod M. RanBP3 усиливает ядерный экспорт активного (бета) -катенина независимо от CRM1. J Cell Biol. 2005; 171: 785–797. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 47. Clevers H. Передача сигналов Wnt / бета-катенина в развитии и болезни. Клетка. 2006; 127: 469–480. [PubMed] [Google Scholar] 48. Рейя Т., Клеверс Х.Передача сигналов Wnt в стволовых клетках и раке. Природа. 2005; 434: 843–850. [PubMed] [Google Scholar] 49. Харланд Р., Герхарт Дж. Формирование и функции организатора Спеманна. Annu Rev Cell Dev Biol. 1997; 13: 611–667. [PubMed] [Google Scholar] 50. Kramps T, Peter O, Brunner E, Nellen D, Froesch B, Chatterjee S, Murone M, Zullig S, Basler K. Передача сигналов Wnt / wingless требует BCL9 / legless-опосредованного рекрутирования пигопа в ядерный комплекс бета-катенин-TCF. Клетка. 2002; 109: 47–60. [PubMed] [Google Scholar] 51. Паркер Д.С., Джемисон Дж., Кэдиган К.М.Pygopus, ядерный белок PHD-finger, необходимый для передачи сигналов Wingless у Drosophila. Разработка. 2002; 129: 2565–2576. [PubMed] [Google Scholar] 52. Томпсон Б., Таунсли Ф., Розин-Арбесфельд Р., Мусиси Х., Бьенц М. Новый ядерный компонент сигнального пути Wnt. Nat Cell Biol. 2002. 4: 367–373. [PubMed] [Google Scholar] 53. Townsley FM, Cliffe A, Bienz M. Pygopus и Legless нацелены на Armadillo / бета-катенин в ядро, чтобы включить его функцию транскрипционного коактиватора. Nat Cell Biol. 2004. 6: 626–633.[PubMed] [Google Scholar] 54. Jessen JR, Solnica-Krezel L. Образование оси — бета-катенин захватывает Wnt. Клетка. 2005; 120: 736–737. [PubMed] [Google Scholar] 55. Tao Q, Yokota C, Puck H, Kofron M, Birsoy B, Yan D, Asashima M, Wylie CC, Lin X, Heasman J. Материнский wnt11 активирует канонический путь передачи сигналов wnt, необходимый для формирования оси у эмбрионов Xenopus. Клетка. 2005; 120: 857–871. [PubMed] [Google Scholar] 56. Де Робертис Э.М., Ларрейн Дж., Ольгешлагер М., Уэссели О. Создание организатора Спеманна и формирования паттерна эмбриона позвоночных.Nat Rev Genet. 2000; 1: 171–181. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 58. Де Робертис Е.М., Курода Х. Формирование дорсально-вентрального паттерна и нейральная индукция у эмбрионов Xenopus. Annu Rev Cell Dev Biol. 2004. 20: 285–308. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 59. Seifert JR, Mlodzik M. Передача сигналов Frizzled / PCP: консервативный механизм, регулирующий полярность и направленную подвижность клеток. Nat Rev Genet. 2007. 8: 126–138. [PubMed] [Google Scholar] 60. Млодзик М. Планарная поляризация клеток: регулируют ли одни и те же механизмы полярность тканей дрозофилы и гаструляцию позвоночных? Тенденции Genet.2002; 18: 564–571. [PubMed] [Google Scholar] 61. Ван И, Натанс Дж. Полярность тканей / планарных клеток у позвоночных: новые идеи и новые вопросы. Разработка. 2007. 134: 647–658. [PubMed] [Google Scholar] 62. Валлингфорд Дж. Б., Фрейзер С. Е., Харланд РМ. Конвергентное расширение: молекулярный контроль движения поляризованных клеток во время эмбрионального развития. Dev Cell. 2002; 2: 695–706. [PubMed] [Google Scholar] 63. Келлер Р., Дэвидсон Л.А., Шук Д.Р. Как мы сформированы: биомеханика гаструляции. Дифференциация. 2003. 71: 171–205.[PubMed] [Google Scholar] 64. Veeman MT, Axelrod JD, Moon RT. Второй канон. Функции и механизмы бета-катенин-независимой передачи сигналов Wnt. Dev Cell. 2003. 5: 367–377. [PubMed] [Google Scholar] 65. Djiane A, Riou J, Umbhauer M, Boucaut J, Shi D. Роль frizzled 7 в регуляции конвергентных движений разгибания во время гаструляции у Xenopus laevis. Разработка. 2000; 127: 3091–3100. [PubMed] [Google Scholar] 66. Habas R, Dawid IB, He X. Коактивация Rac и Rho с помощью передачи сигналов Wnt / Frizzled необходима для гаструляции позвоночных.Genes Dev. 2003. 17: 295–309. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 67. Habas R, Kato Y, He X. Активация Rho Wnt / Frizzled регулирует гаструляцию позвоночных и требует нового белка гомологии Formin Daam1. Клетка. 2001; 107: 843–854. [PubMed] [Google Scholar] 68. Парк М, Луна RT. Ген плоской клеточной полярности stbm регулирует клеточное поведение и клеточную судьбу у эмбрионов позвоночных. Nat Cell Biol. 2002; 4: 20–25. [PubMed] [Google Scholar] 69. Сокол SY. Анализ растрепанных сигнальных путей во время развития Xenopus.Curr Biol. 1996; 6: 1456–1467. [PubMed] [Google Scholar] 70. Tahinci E, Symes K. Отдельные функции Rho и Rac необходимы для конвергентного расширения во время гаструляции Xenopus. Dev Biol. 2003. 259: 318–335. [PubMed] [Google Scholar] 71. Takeuchi M, Nakabayashi J, Sakaguchi T., Yamamoto TS, Takahashi H, Takeda H, Ueno N. Ген, связанный с колючками, у позвоночных важен для движений гаструляционных клеток. Curr Biol. 2003. 13: 674–679. [PubMed] [Google Scholar] 72. Veeman MT, Slusarski DC, Kaykas A, Louie SH, Moon RT.Колючка рыбок данио, модулятор неканонической передачи сигналов Wnt / Fz, регулирует движения гаструляции. Curr Biol. 2003. 13: 680–685. [PubMed] [Google Scholar] 73. Jessen JR, Topczewski J, Bingham S, Sepich DS, Marlow F, Chandrasekhar A, Solnica-Krezel L. Трилобиты рыбок данио определяют новые роли косоглазия в гаструляции и движениях нейронов. Nat Cell Biol. 2002; 4: 610–615. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 74. Carreira-Barbosa F, Concha ML, Takeuchi M, Ueno N, Wilson SW, Tada M. Prickle 1 регулирует движения клеток во время гаструляции и миграции нейронов у рыбок данио.Разработка. 2003; 130: 4037–4046. [PubMed] [Google Scholar] 75. Пак Э., Ким Г.Х., Чой СК, Хан Дж.К. Роль PKA как негативного регулятора сигнального пути PCP во время гаструляционных движений Xenopus. Dev Biol. 2006; 292: 344–457. [PubMed] [Google Scholar] 76. Tahinci E, Thorne CA, Franklin JL, Salic A, Christian KM, Lee LA, Coffey RJ, Lee E. Lrp6 необходим для конвергентного расширения во время гаструляции Xenopus. Разработка. 2007. 134: 4095–4106. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 77. Сасай Н., Накадзава Ю., Харагути Т., Сасай Ю.Белок NRh2, связанный с рецептором нейротрофина, необходим для конвергентных движений разгибания. Nat Cell Biol. 2004; 6: 741–748. [PubMed] [Google Scholar] 78. Лу В., Ямамото В., Ортега Б., Балтимор Д. Рык млекопитающих — это корецептор Wnt, необходимый для стимуляции роста нейритов. Клетка. 2004. 119: 97–108. [PubMed] [Google Scholar] 79. Lu X, Borchers AG, Jolicoeur C, Rayburn H, Baker JC, Tessier-Lavigne M. PTK7 / CCK-4 представляет собой новый регулятор полярности плоских клеток у позвоночных. Природа. 2004; 430: 93–98. [PubMed] [Google Scholar] 80.Nishita M, Yoo SK, Nomachi A, Kani S, Sougawa N, Ohta Y, Takada S, Kikuchi A, Minami Y. Формирование филоподий, опосредованное рецепторной тирозинкиназой Ror2, необходимо для индуцированной Wnt5a миграции клеток. J Cell Biol. 2006; 175: 555–562. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 81. Танегашима К., Чжао Х., Давид И.Б. WGEF активирует Rho в пути Wnt-PCP и контролирует конвергентное удлинение при гаструляции Xenopus. EMBO J. 2008; 27: 606–617. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 82. Марлоу Ф., Топчевски Дж., Сепич Д., Сольница-Крезель Л.Rho kinase 2 рыбок данио действует ниже Wnt11, опосредуя клеточную полярность и эффективные движения конвергенции и разгибания. Curr Biol. 2002; 12: 876–884. [PubMed] [Google Scholar] 83. Weiser DC, Pyati UJ, Kimelman D. Gravin регулирует изменения поведения мезодермальных клеток, необходимые для удлинения оси во время гаструляции рыбок данио. Genes Dev. 2007; 21: 1559–1571. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 84. Li L, Yuan H, Xie W, Mao J, Caruso AM, McMahon A, Sussman DJ, Wu D. Растрепанные белки ведут к двум сигнальным путям.Регуляция N-концевой киназы LEF-1 и c-Jun в клетках млекопитающих. J Biol Chem. 1999. 274: 129–134. [PubMed] [Google Scholar] 85. Сольница-Крезель Л. Консервированные паттерны клеточных движений во время гаструляции позвоночных. Curr Biol. 2005; 15: 213–228. [PubMed] [Google Scholar] 86. Уоллингфорд Дж. Б., Харланд РМ. Передача сигналов Xenopus Disheveled регулирует как нервное, так и мезодермальное конвергентное расширение: параллельные силы, удлиняющие ось тела. Разработка. 2001; 128: 2581–2592. [PubMed] [Google Scholar] 87. Ито К., Бротт Б.К., Бэ ГУ, Рэтклифф М.Дж., Сокол С.Ю.Ядерная локализация необходима для функции Disheveled в передаче сигналов Wnt / β-catenin. J Biol. 2005; 4: 3. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 88. Park TJ, Gray RS, Sato A, Habas R, Wallingford JB. Субклеточная локализация и сигнальные свойства растрепанных эмбрионов позвоночных. Curr Biol. 2005; 15: 1039–1044. [PubMed] [Google Scholar] 89. Гейзенберг С.П., Тада М., Раух Г.Дж., Сауде Л., Конча М.Л., Гейслер Р., Стемпл Д.Л., Смит Дж. К., Уилсон С.В. Silberblick / Wnt11 обеспечивает конвергентные движения разгибания во время гаструляции рыбок данио.Природа. 2000; 405: 76–81. [PubMed] [Google Scholar] 90. Кон А.Д., Мун RT. Передача сигналов Wnt и кальция: бета-катенин-независимые пути. Клеточный кальций. 2005. 38: 439–446. [PubMed] [Google Scholar] 92. Гилланд Э., Миллер А.Л., Карплюс Э, Бейкер Р., Уэбб С.Е. Визуализация многоклеточных крупномасштабных ритмических волн кальция во время гаструляции рыбок данио. Proc Natl Acad Sci USA. 1999; 96: 157–161. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 93. Валлингфорд Дж. Б., Эвальд А. Дж., Харланд Р. М., Фрейзер С. Е.. Передача сигналов кальция во время конвергентного расширения у Xenopus.Curr Biol. 2001; 11: 652–661. [PubMed] [Google Scholar] 94. Slusarski DC, Corces VG, Moon RT. Взаимодействие Wnt и гомолога Frizzled запускает связанный с G-белком сигнал фосфатидилинозитола. Природа. 1997; 390: 410–413. [PubMed] [Google Scholar] 95. Слюсарски Д.К., Янг-Снайдер Дж., Буса В.Б., Мун RT. Модуляция эмбриональной внутриклеточной передачи сигналов Ca ²⁺ с помощью Wnt-5A. Dev Biol. 1997. 182: 114–120. [PubMed] [Google Scholar] 96. Sheldahl LC, Slusarski DC, Pandur P, Miller JR, Kuhl M, Moon RT. Растрепанный активирует поток Ca ²⁺, PKC и CamKII в эмбрионах позвоночных.J Cell Biol. 2003. 161: 769–777. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 97. Kuhl M, Sheldahl LC, Malbon CC, Moon RT. Ca (2 +) / кальмодулин-зависимая протеинкиназа II стимулируется гомологами Wnt и Frizzled и способствует судьбе вентральных клеток у Xenopus. J Biol Chem. 2000; 275: 12701–12711. [PubMed] [Google Scholar] 98. Saneyoshi T, Kume S, Amasaki Y, Mikoshiba K. Путь Wnt / кальция активирует NF-AT и способствует судьбе вентральных клеток у эмбрионов Xenopus. Природа. 2002; 417: 295–299. [PubMed] [Google Scholar] 99.Ishitani T, Ninomiya-Tsuji J, Nagai S, Nishita M, Meneghini M, Barker N, Waterman M, Bowerman B, Clevers H, Shibuya H, Matsumoto K. Путь, связанный с TAK1-NLK-MAPK, препятствует передаче сигналов между бета-катенином. и фактор транскрипции TCF. Природа. 1999; 399: 798–802. [PubMed] [Google Scholar] 100. Winklbauer R, Medina A, Swain RK, Steinbeisser H. Передача сигналов Frizzled-7 контролирует разделение тканей во время гаструляции Xenopus. Природа. 2001; 413: 856–860. [PubMed] [Google Scholar] 101. Westfall TA, Brimeyer R, Twedt J, Gladon J, Olberding A, Furutani-Seiki M, Slusarski DC.Wnt-5 / pipetail действует в формировании оси позвоночных как негативный регулятор активности Wnt / бета-катенина. J Cell Biol. 2003. 162: 889–898. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 102. Salinas PC. Факторы Wnt в ремоделировании аксонов и синаптогенезе. Biochem Soc Symp. 1999; 65: 101–109. [PubMed] [Google Scholar] 103. Salinas PC. Модуляция цитоскелета микротрубочек: роль дивергентного канонического пути Wnt. Trends Cell Biol. 2007. 17: 333–342. [PubMed] [Google Scholar] 104. Шмитт А.М., Ши Дж., Вольф А.М., Лу СС, Кинг Л.А., Цзоу Ю.Передача сигналов Wnt-Ryk обеспечивает медиально-латеральное топографическое картирование сетчатки. Природа. 2006; 439: 31–37. [PubMed] [Google Scholar] 105. Zou Y. Передача сигналов Wnt в ведении аксонов. Trends Neurosci. 2004. 27: 528–532. [PubMed] [Google Scholar] 106. Habas R, He X. Передача сигналов клеток: переход на Wnt-Rap. Curr Biol. 2007; 17: 474–477. [PubMed] [Google Scholar] 107. Tsai IC, Amack JD, Gao ZH, Band V, Yost HJ, Virshup DM. Путь Wnt-CKIvarepsilon-Rap1 регулирует гаструляцию путем модуляции SIPA1L1, белка, активирующего Rap GTPase.Dev Cell. 2007. 12: 335–347. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 108. Choo AY, Roux PP, Blenis J. Не забывайте о промежутке: Wnt садится на поезд mTORC1. Клетка. 2006; 126: 834–836. [PubMed] [Google Scholar] 109. Inoki K, Ouyang H, Zhu T, Lindvall C, Wang Y, Zhang X, Yang Q, Bennett C, Harada Y, Stankunas K, Wang CY, He X, MacDougald OA, You M, Williams BO, Guan KL. TSC2 интегрирует Wnt и энергетические сигналы посредством координированного фосфорилирования AMPK и GSK3 для регулирования роста клеток. Клетка. 2006. 126: 955–968. [PubMed] [Google Scholar] 110.Доллар Г.Л., Вебер Ю., Млодзик М, Сокол С.Ю. Регулирование смертельных гигантских личинок от Disheveled. Природа. 2005; 437: 1376–1380. [PubMed] [Google Scholar] 111. Чен А.Е., Джинти Д.Д., Фан СМ. Передача сигналов протеинкиназы A через CREB контролирует миогенез, индуцированный белками Wnt. Природа. 2005; 433: 317–322. [PubMed] [Google Scholar] 112. Schambony A, Wedlich D. Wnt-5A / Ror2 регулируют экспрессию XPAPC через альтернативный неканонический путь передачи сигналов. Dev Cell. 2007; 12: 779–792. [PubMed] [Google Scholar] 113. Endo Y, Rubin JS.Передача сигналов Wnt и рост нейритов: выводы и вопросы. Cancer Sci. 2007. 98: 1311–1317. [PubMed] [Google Scholar] 114. Пандур П., Маурус Д., Кул М. Все сложнее: новые игроки входят в сигнальную сеть Wnt. Биологические исследования. 2002. 24: 881–884. [PubMed] [Google Scholar] 116. Бутрос М., Млоджик М. Растрепанный: на перекрестке расходящихся внутриклеточных сигнальных путей. Mech Dev. 1999; 83: 27–37. [PubMed] [Google Scholar] 117. Ротбахер У., Лоран М.Н., Дирдорф М.А., Кляйн П.С., Чо К.В., Фрейзер С.Е. Растрепанное фосфорилирование, субклеточная локализация и мультимеризация регулируют его роль в раннем эмбриогенезе.EMBO J. 2000; 19: 1010–1022. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 118. Boutros M, Paricio N, Strutt DI, Mlodzik M. Disheveled активирует JNK и различает пути JNK в плоской полярности и бескрылую передачу сигналов. Клетка. 1998. 94: 109–118. [PubMed] [Google Scholar] 119. Розин-Арбесфельд Р., Таунсли Ф., Бьенц М. Супрессор опухолей APC выполняет функцию ядерного экспорта. Природа. 2000; 406: 1009–1012. [PubMed] [Google Scholar] 120. Валлингфорд Дж. Б., Роунинг Б. А., Фогели К. М., Ротбахер Ю., Фрейзер С. Е., Харланд Р. М..Растрепанный контролирует полярность клеток во время гаструляции Xenopus. Природа. 2000; 405: 81–85. [PubMed] [Google Scholar]
Тендер Правительства Российской Федерации на оказание услуг по организации досуга и
Реквизиты покупателя
Заказчик: МИНИСТЕРСТВО РЕГУЛИРОВАНИЯ ДОГОВОРНОЙ СИСТЕМЫ В ОБЛАСТИ ЗАКУПОК ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ
664003, Иркутская область, города областного подчинения Иркутской области /, г. Иркутск, Иркутская область, г. Иркутск, ул. Сухэ-Батора., 15
Контактное лицо: Папанова Н.В.
Телефон: 217226
Факс: +7 3952 341867
Россия
Электронная почта: [email protected]
Прочая информация
TOT Ref No.: 40797130
Номер документа. №: 0134200000120000383
Конкурс: ICB
Финансист: Самофинансируемый
Информация о тендере
Конкурс приглашается на оказание услуг по организации досуга и отдыха детей, родители (законные представители) которых состоят в трудовых отношениях с организациями, независимо от их организационно-правовой формы и формы собственности, в детском оздоровительном лагере.
Начальная (максимальная) цена контракта:
Начальная (максимальная) цена контракта 719 712.00 Валюта Российский рубль Размер аванса,% 30,00 Идентификационный код закупки (ИКЗ) 202380817098638080100100750215520323
Информация об источниках финансирования по годам Информация об источниках финансирования по годам KBK / KOSGU / KVRVegabout, ₽ 2020 (год),
₽ Финансовое обеспечение закупки ( Российский рубль)
719 712,00 719 712,00
Финансовая поддержка из бюджетных средств (российский рубль)
КБК и обеспечение КБК 80607075340229999323 719 712,00 719 712.00
Итого (1 запись): 719 712,00 719 712,00
Процедура подачи заявки:
Заявки на участие в конкурсе с ограниченным участием в электронной форме подаются только лицами, зарегистрированными в единой информационной системе и аккредитованными на электронной площадке, с учетом положений статьи 112 Федерального закона от 05.04.2013 № 44 -ФЗ -О Контрактной системе-в сфере закупки товаров, работ, услуг для государственных и муниципальных нужд — (далее — Федеральный закон от 25.07.2012 г.44-ФЗ). Заявка на участие в конкурсе с ограниченным участием в электронной форме состоит из двух частей и предложения участника конкурса с ограниченным участием в электронной форме (далее — претендент) о цене договора, сумме цены единиц товаров, работ, услуг.
.

Обеспечение исполнения контракта по 44-ФЗ для СМП в 2021 году на Avansa

Особенности обеспечения 44-ФЗ при участии субъектов малого предпринимательства

Порядок оплаты электроэнергии: законно ли требование аванса?

Нормативные порядок и сроки оплаты

Позиция суда относительно изменения порядка оплаты

Договорный порядок оплаты

Позиция суда относительно изменения сроков оплаты

Выводы

Ответственность за просрочку оплаты электроэнергии

Судебная практика по привлечению к ответственности за просрочку оплаты

Защита от незаконных требований электроснабжающей организации

Правительство временно разрешило увеличить размер авансирования по госконтрактам до 50%

Внесение изменений в законодательство о государственных закупках в соответствии с Федеральным законом от 25.07.2012 г. 44-ФЗ вызвано пандемией COVID-19

31 Кодекс США § 3324 — Авансы | Кодекс США | Закон США

Срок оплаты по договору — 44 ФЗ. Ужесточены условия оплаты контрактов со стороны заказчиков. Ограничения по срокам предоплаты

Аванс по госзаказу

Когда авансовые платежи запрещены

Сумма аванса

Поиск покупок с предоплатой

Оплата при доставке

Поэтапная оплата

Платеж по договору 44-ФЗ

Максимальный срок платежа по договору 44-ФЗ

Штрафы по 44-ФЗ за нарушение сроков оплаты по договору

Вопросы по оплате договора 44-ФЗ

Арбитражная практика

Порядок и условия оплаты по договорам ФЗ 44

Мелкие закупки (до 100 и 400 тысяч)

Покупки до 100 тысяч рублей по 44-фз: особенности

Какой срок оплаты по договору до 100 000 рублей?

Сроки оплаты договоров покупателями ужесточены

Платеж по договору 44-ФЗ

Максимальный срок платежа по договору 44-ФЗ

Штрафы по 44-ФЗ за нарушение сроков оплаты по договору

Вопросы по оплате договора 44-ФЗ

Арбитражная практика

Ограничения по срокам предоплаты

Предоплата по 44 кв. Уточнение фас

Аванс за разъяснение 44 фз фас

44 фз статья 37 п 3. Заказчик имеет право на это только в случаях, когда

Статья 37 44 ФЗ с последними изменениями

Федеральный закон № 44-ФЗ «О контрактной системе в сфере закупок товаров, работ, услуг для обеспечения государственных и муниципальных нужд»

44 Федеральный закон о закупках с последними изменениями

Что такое демпинговые и антидемпинговые меры

Суть статьи 37 Закона № 44-ФЗ

Спорные ситуации

Что искать

Антидемпинговые меры при отдельных видах закупок

Аналитика ЭЭГ для раннего выявления расстройства аутистического спектра: подход, основанный на данных

Участники

Клиническая оценка

Процедура сбора ЭЭГ

Анализ данных ЭЭГ

Полосы частот

Характеристики нелинейных сигналов

Выбор и классификация характеристик

Прогнозирование РАС и тяжести симптомов

Тестирование значимости

Мультимасштаб и диапазоны частот

Необходимые пакеты программного обеспечения

Доступность данных ЭЭГ

Пути передачи сигнала Wnt

Юко Комия

Раймонд Хабас

Abstract

Введение

Секреция Wnt и внеклеточные регуляторы

Канонический путь Wnt

Неканонический путь планарной полярности клеток

Неканонический путь Wnt / Ca

Другие пути передачи сигналов Wnt

Специфичность сигнала

Заключение

Благодарности

Список литературы

Тендер Правительства Российской Федерации на оказание услуг по организации досуга и

Отменить ответ